目的：建立小鼠腦脊髓炎病毒RT-PCR方法并對方法進(jìn)行初步應用。

　　方法：根據NCBI發(fā)表的TMEV GD VII株(GI:62039)基因組序列設計特異引物,建立RT-PCR方法,驗證方法的敏感性和特異性;腦腔接種方式感染9只BALB/c小鼠,感染后第6天采集動(dòng)物的腦、心、肝、脾、肺、腎、盲腸內容物和血清等樣本,用建立的方法進(jìn)行檢測;同時(shí)檢測100份小鼠盲腸內容物樣本,對方法進(jìn)行初步應用。

　　結果：以GD VII RNA為模板,建立的RT-PCR方法能夠擴增出約371bp的單一目的條帶,敏感性驗證顯示能夠檢測到的最低GD VII cDNA量為0.69pg/μL;以腦心肌炎病毒、淋巴細胞脈絡(luò )叢腦膜炎病毒、日本乙型腦炎病毒、小鼠諾如病毒及正常小鼠腦組織為對照進(jìn)行方法特異性驗證,均未出現目的條帶。腦腔接種感染小鼠,所有小鼠在接種第3天均產(chǎn)生不同程度的精神萎靡后肢麻痹等癥狀,其中2只小鼠于第5天死亡;采集心、肝、脾、肺、腎、腦、盲腸內容物及血清等樣本進(jìn)行檢測,所有小鼠的腦組織均檢測到GD VII RNA,而其他組織均未檢測到;對100份小鼠盲腸內容物進(jìn)行檢測,結果均為陰性。

　　結論：建立的TMEV GDVII株RT-PCR方法能夠高效的檢測小鼠組織中的病毒感染,可作為實(shí)驗動(dòng)物國家標準的有力補充。