目的:觀(guān)察Sjp40在感染新西蘭白兔肝臟沉積蟲(chóng)卵及其肉芽腫病變形成中的表達情況,并進(jìn)行免疫定位。
方法:日本血吸蟲(chóng)尾蚴感染新西蘭白兔,收集未感染組、29 dpi組和45 dpi組肝臟,Trizol法提取各組肝臟總RNA,以日本血吸蟲(chóng)甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)為內參,Taqman探針qRT-PCR檢測Sjp40 mRNA的表達;提取各組肝臟總蛋白,以硫酸銨鹽析法和Protein G免疫親和柱層析法純化的抗Sjp40-McAb 9G7和抗弓形蟲(chóng)tSAG1-McAb Y3A8(對照抗體),western blot檢測Sjp40蛋白的表達;制備肝臟石蠟切片,HE染色觀(guān)察肝臟蟲(chóng)卵肉芽腫的形成與發(fā)展,進(jìn)一步以免疫熒光技術(shù)進(jìn)行Sjp40在肝臟沉積蟲(chóng)卵及其肉芽腫組織中的定位。
結果:日本血吸蟲(chóng)感染兔呈急性肝肉芽腫病變期的45 dpi肝臟沉積蟲(chóng)卵中Sjp40 mRNA水平顯著(zhù)高于29 dpi 尚未形成蟲(chóng)卵肉芽腫結節的肝臟沉積的未成熟蟲(chóng)卵(P<0.05),westernb blot 證實(shí)了Sjp40 蛋白在29 dpi 和45 dpi 兔肝臟中的表達。免疫熒光顯示:Sjp40在29 dpi兔肝臟中定位于未成熟蟲(chóng)卵內,而45 dpi可見(jiàn)感染兔肝臟中沉積大量成簇內含毛蚴的成熟蟲(chóng)卵及其周?chē)庋磕[組織均有明顯熒光。
結論:Sjp40在日本血吸蟲(chóng)感染兔肝臟沉積蟲(chóng)卵中的轉錄水平隨蟲(chóng)卵發(fā)育成熟而顯著(zhù)增加,在感染兔急性肉芽腫病變期(45dpi)呈現由蟲(chóng)卵向其周?chē)庋磕[組織擴散現象,提示該分子在血吸蟲(chóng)肉芽腫形成與發(fā)展過(guò)程中具有重要作用。