目的: 建立EV71對樹(shù)鼩原代腎細胞的感染模型。
方法: 胰蛋白酶消化法獲得樹(shù)鼩的原代腎細胞,用EV71感染樹(shù)鼩腎細胞,測定1、2、4、6和8 d培養上清病毒滴度,分別用Western blot和間接免疫熒光法檢測細胞中EV71病毒VP1蛋白的表達,以確定EV71病毒對樹(shù)鼩原代腎細胞的感染性。
結果: 對分離得到的樹(shù)鼩原代腎細胞進(jìn)行傳代純化和形態(tài)鑒別,建立以樹(shù)鼩原代腎細胞為主的細胞培養。用EV71病毒感染樹(shù)鼩原代腎細胞,感染后48 ~ 96 h病毒滴度可達到1.3×106 TCID50/mL,說(shuō)明EV71病毒可有效感染樹(shù)鼩原代腎細胞并有效增殖。Western blot檢測發(fā)現,EV71病毒VP1蛋白可在感染后2 ~ 8 d的樹(shù)鼩原代腎細胞中有效檢出,間接免疫熒光法則在感染后2 ~ 6 d細胞的細胞質(zhì)中檢測到病毒VP1蛋白的分布。
結論: 在成功建立樹(shù)鼩原代腎細胞培養的基礎上,確定了EV71病毒對樹(shù)鼩原代腎細胞的感染性和病毒增殖特性,初步建立了EV71樹(shù)鼩原代腎細胞感染模型。