【造模機制】在外周血管中形成血栓,讓栓子通過(guò)血液流動(dòng)到達肺動(dòng)脈,阻塞肺動(dòng)脈,形成栓塞。
【造模方法】
1.Nowak法 動(dòng)物麻醉后,游離出一側頸靜脈和一側頸總動(dòng)脈,動(dòng)脈插管和靜脈插管,其中,動(dòng)脈插管和靜脈插管用三通管相連,三通管另一端與1ml注射器相連,注射器內吸取有0.6ml凝血酶(10NIH凝血酶U/ml),開(kāi)啟動(dòng)脈插管和注射器之間的通道,使血液流入注射器內1ml,關(guān)閉該通道,取下注射器振搖數次,使凝血酶和血液充分混勻,然后將凝血酶處理后的血液再通過(guò)三通管注入頸靜脈。注意此時(shí)一定要夾閉頸靜脈10分鐘,待血栓形成后,移去靜脈夾,釋放栓子,栓子隨血液流動(dòng)到達肺動(dòng)脈,即可形成肺栓塞模型。
2.碘標記法(Lodogen法) 常用I標記纖維蛋白原后,再把含有125I的纖維蛋白原和凝血酶混合,制成125I標記的血凝塊,然后注入動(dòng)物體內,標記常用Lodogen法。具體步驟如下:取Lodogen液,用三氯甲烷溶解,室溫下氮氣吹干制成反應管,加入纖維蛋白溶液,立即加入Na125I 11.1×10Bq,充分振蕩混勻,標記反應混合物加至凝膠柱層析脫碘,
磷酸緩沖液洗脫。留取標記纖維蛋白原峰洗脫液,-20℃保存備用,控制放射性比活度在2.78×10Bq/ mg左右確保纖維蛋白原有良好的凝血酶活性。然后在枸櫞酸鈉抗凝新鮮人全血中順序加入125I纖維蛋白原、CaCl2和人凝血酶,混合液用聚乙烯管迅速抽吸混勻,37℃溫育20分鐘在管內形成條狀125I血栓,轉移至三角燒瓶用生理鹽水振蕩漂洗。漂洗后將125I血栓切成等長(cháng)小條,分別測量和記錄放射性。
【模型特點(diǎn)】由于家兔的體型適中,價(jià)格不高,飼養方便,繁殖率與成活率高,性情溫順;家兔的纖溶系統比其他實(shí)驗動(dòng)物更接近于人體纖溶系統,故家兔肺栓塞是目前最為成熟和普遍,也是最為理想的動(dòng)物模型。
犬的肺栓塞模型注入栓子后肺動(dòng)脈平均壓和肺血管阻力可以恒定地維持在高水平達4小時(shí)而不降低,在對該模型溶栓后肺動(dòng)脈平均壓和肺血管阻力30分鐘后即開(kāi)始顯著(zhù)下降,符合肺栓塞患者的臨床表現,是極為理想的模型。而且,犬的血容量豐富,能耐受多次抽血化驗,可避免單純抽血引起的循環(huán)系統變化。
【模型評估和應用】由于該法主要是在體外形成血栓注入體內,所以相對于人體在形成肺栓塞時(shí)常有高凝狀態(tài),凝血機制失衡引起,該模型沒(méi)有體現出機體的高凝狀態(tài),故仍有不足之處。如果用犬來(lái)制作該模型,犬的個(gè)體較大,性格生猛,對陌生實(shí)驗人員攻擊性強,具有一定危險性,且價(jià)格較為昂貴,多用于操作較為復雜的研究。