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缺血性急性腎衰竭動(dòng)物模型

  【造模機制】切除右腎并夾閉左腎動(dòng)脈,造成腎缺血性線(xiàn)粒體功能障礙,產(chǎn)生大量次黃嘌呤。缺氧條件下,次黃嘌呤不能代謝為黃嘌呤而大量堆積,一旦血流再灌注,次黃嘌呤代謝為嘌呤并進(jìn)一步代謝為尿酸,產(chǎn)生大量超氧陰離子,進(jìn)一步產(chǎn)生羥自由基和H2O2,通過(guò)膜的脂質(zhì)過(guò)氧化對腎臟造成損害,導致細胞壞死和臟器功能減退。

  【造模方法】

  1.選用體重180~220g雄性Sprague Dawley大鼠。戊巴比妥鈉(40mg/kg)腹腔注射麻醉,使大鼠仰臥位固定于手術(shù)臺上,腹部去毛后以苯扎溴銨(新潔爾滅)局部消毒,沿腹正中線(xiàn)縱向切口打開(kāi)腹腔,先暴露右腎,在顯微鏡下分離出右腎蒂及右輸尿管,以10#絲線(xiàn)分別結扎整個(gè)腎蒂和右輸尿管并取下右腎。暴露左腎并分離出左腎蒂,用無(wú)創(chuàng )傷性?shī)A鉗夾閉腎蒂60分鐘后,松夾恢復腎灌注,此時(shí)腎臟顏色先由鮮紅色轉為蒼白或暗紅色,再變成鮮紅色,表明再灌注成功。觀(guān)察術(shù)野無(wú)出血和滲血后逐層縫合關(guān)閉腹腔。假手術(shù)組麻醉、打開(kāi)腹腔等方式均同上,暴露左右兩腎后鈍性分離腎包膜即可。

  2.腎功能檢測

  分別在第1、6、12、24、36小時(shí)采集尾靜脈血測定BUN、Cr濃度。形態(tài)學(xué)觀(guān)察:手術(shù)后36小時(shí)取下殘腎置入4%中性甲醛溶液固定24小時(shí)后梯度乙醇脫水,二甲苯透明、浸蠟、包埋、連續切片,H&E染色。

  【模型特點(diǎn)】造模大鼠血清Cr和BUN濃度在6小時(shí)后開(kāi)始顯著(zhù)上升。并于24小時(shí)達高峰,以后逐漸下降,提示急性腎衰竭動(dòng)物模型建立成功。再灌注確切。形態(tài)學(xué)上,假手術(shù)組光鏡下基本正常, ARF組腎小球無(wú)明顯異常,近曲小管上皮細胞出現崩解、壞死、脫落,管腔內可見(jiàn)細胞碎片及管型,管腔擴張,遠端小管內形成大量蛋白,壞死脫落細胞形成細胞管型,組織結構松散,尿液外滲。腎小管管型程度和損傷程度指數明顯升高。

  【模型評估和應用】急性腎衰竭動(dòng)物模型的建立方法較多,主要有兩大類(lèi):缺血性和腎毒性。采用切除大鼠右腎并夾閉左腎動(dòng)脈方法建立的缺血性ARF具有簡(jiǎn)便有效、成功率高的優(yōu)點(diǎn),而且腎功能和腎小管等形態(tài)學(xué)病理改變典型、穩定,主要用來(lái)研究ARF發(fā)病機制和氧自由基清除劑對ARF的防治作用。

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