中耳炎(otitis media with effusion,OME)主要分為化膿性(suppurative)中耳炎和分泌性(secretory)中耳炎兩種。在抗生素未全面發(fā)展的時(shí)代，兒童化膿性OME的發(fā)病率很高，常導致鼓膜穿孔、中耳乳突炎及顱內、外并發(fā)癥，造成嚴重的傳導性耳聾或神經(jīng)性耳聾，嚴重時(shí)可導致兒童死亡。分泌性 OME在兒童中發(fā)病率高，是引起小兒聽(tīng)力下降的常見(jiàn)原因之一。咽鼓管功能障礙，其原因包括：腺樣體肥大、鼻腔和鼻咽部疾病、腭裂、咽鼓管上皮內表面活性物質(zhì)缺乏或不足、咽鼓管的清潔和防御功能障礙。病毒及衣原體和支原體的感染和免疫反應等。隨著(zhù)抗生素的發(fā)展，中耳感染的發(fā)病率明顯下降，但咽鼓管功能差，可導致自發(fā)性OME。

　　【造模機制】近年來(lái)的研究證明，中耳并非免疫豁免部位，在外來(lái)抗原激發(fā)下可產(chǎn)生較強的局部免疫反應。無(wú)論是中耳注射細菌、內毒素或其他抗原物質(zhì)或是手術(shù)造成耳咽管功能障礙等OME動(dòng)物模型，中耳黏膜的急性化膿性炎癥感染導致咽鼓管咽口及管腔黏膜出現充血、腫脹，纖毛運動(dòng)發(fā)生障礙，致病菌乘虛侵入中耳，引起OME。常見(jiàn)的致病菌主要是肺炎球菌、流感嗜血桿菌等。而細菌的分解產(chǎn)物內毒素，導致中耳黏膜的炎癥反應及中耳腔滲出。其基本表現為：致病物質(zhì)導致中耳黏膜處炎性細胞浸潤，早期見(jiàn)杯狀細胞纖毛上皮部分消失，杯狀細胞明顯增生。而細菌死亡時(shí)釋放的活性物質(zhì)——內毒素，它的主要成分為脂多糖，能引起中耳黏膜結締組織增生。細胞密度增大，毛細血管通透性增高，腺體及杯狀細胞的分泌增加，破壞正常黏膜運轉系統，促進(jìn)中耳積液的蓄積，使中性粒細胞募集，大量的黏液細胞增生與化生。內毒素還可經(jīng)過(guò)經(jīng)典途徑及替補途徑激活補體，使嗜堿性粒細胞或肥大細胞釋放組胺、5-羥色胺、激肽和其他血管活性介質(zhì)作用于靶細胞，從而引起血管擴張，毛細血管通透性增加，同時(shí)趨化因子能吸引白細胞向炎性病灶部位聚集，促進(jìn)吞噬。在發(fā)揮吞噬作用的過(guò)程中，釋放溶酶體酶等生物活性物質(zhì)，除破壞抗原性異物外，同時(shí)也可損傷鄰近組織和加劇炎癥。嚴重OME中耳結構發(fā)生病理改變，造成傳導性聽(tīng)力損失。細菌或炎癥物質(zhì)循裂隙或兩窗浸潤或擴散進(jìn)入內耳導致內耳出現病理改變，造成感音神經(jīng)性聽(tīng)力損失。

　　細胞因子的免疫調節：細胞因子是一組在炎癥反應和免疫反應中起重要調節作用的糖蛋白，具有多種生物活性。許多研究表明在OME發(fā)病中有細胞因子的參與。研究發(fā)現OME患者中耳積液存在 IL-21、IL-22、IL-26、TNF等，并提示IL-218及IL-26與慢性OME早期階段有關(guān)，而TNF則與疾病的持續狀態(tài)密切相關(guān)。研究還發(fā)現OME早期中耳積液的形成與IL-28高表達直接相關(guān)。OME中耳積液中存在TGF2β，推測TGF2β在慢性OME并發(fā)癥(如膠耳、粘連性OME等纖維化)行程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。另外，機體免疫防御機制缺陷可能是OME發(fā)病的又一環(huán)節，發(fā)現OME患兒血清中存在一些免疫抑制因子，與對照組相比，免疫抑制因子影響T細胞增殖，這些抑制因子對OME持續狀態(tài)的形成起一定作用。

　　通過(guò)小鼠OME模型證實(shí)，NO是產(chǎn)生中耳積液的重要介質(zhì)，其認為慢性OME黏蛋白分泌是NO介導的脂多糖(LPS)與多種細胞因子相互作用的結果。另外，細胞因子(如TNF、IL-28等)與NO相互作用發(fā)揮免疫調節作用，TNF2α增加NO的形成，IL-28則通過(guò)抑制NO合酶而減少NO的生成，當NO合成減少時(shí)，免疫防御作用減弱，影響OME轉歸。

　　長(cháng)期以來(lái)，腺樣體(adenoids)被認為是OME發(fā)病的重要因素，但其致病機制尚未完全明確。目前，認為腺樣體引起OME主要有以下觀(guān)點(diǎn)：①增生肥大的腺樣體壓迫、阻塞咽鼓管，造成鼓室負壓而致黏膜滲液。②增大的腺樣體阻塞后鼻孔，導致吞咽時(shí)鼻咽部壓力升高，致使咽部分泌物向咽鼓管反流進(jìn)入中耳。③腺樣體是細菌的“儲蓄池”。目前已從中耳積液中發(fā)現多種細菌、病毒和支原體等病原體，同時(shí)從OME患兒的鼻咽部和腺樣體組織中也培養出類(lèi)似的病原菌。腺樣體切除治療OME的有效機制可能是通過(guò)減少腺樣體在鼻咽部的細菌池作用。④腺樣體免疫異常。有認為腺樣體的免疫功能異常使鼻咽部黏膜易感染和水腫，這種炎癥和水腫又導致咽鼓管功能紊亂而引起OME。

　　【造模方法】盡管目前OME的動(dòng)物模型種類(lèi)繁多，也的確模擬出了OME的臨床特征，但這種阻塞咽鼓管或直接向中耳腔注入滅活細菌、細胞因子、變應原等的造模方法終究不是OME的實(shí)際發(fā)病途徑，因此，建立更符合0ME實(shí)際發(fā)病過(guò)程的動(dòng)物模型仍將是今后研究的重要課題。

　　1．利用滅活細菌誘導OME模型方法是于1980年建立的，一直沿用至今。所用細菌多為肺炎鏈球菌或流感嗜血桿菌，與臨床中耳積液中檢出的細菌種類(lèi)一致。造模前先用水浴加熱法或甲醛滅活法滅活細菌并制備成一定濃度的細菌混懸液，造模時(shí)依動(dòng)物種類(lèi)、大小不同注入不同量(0.1～0.5ml)的滅活細菌混懸液于中耳腔。注入方法有經(jīng)鼓膜前下象限穿刺注入法和經(jīng)聽(tīng)泡鉆孔注入法(注入后用骨蠟封閉鉆孔)。兩種注入法各有優(yōu)缺點(diǎn)，經(jīng)鼓膜穿刺法簡(jiǎn)單、方便，但因穿刺后造成的鼓膜穿孔和鼓膜炎癥反應會(huì )影響中耳積液的蓄積和對鼓膜顏色的觀(guān)察；經(jīng)聽(tīng)泡鉆孔注入法保持了鼓膜的完整性，但需手術(shù)暴露聽(tīng)泡，對動(dòng)物創(chuàng )傷大，且易感染。采用經(jīng)豚鼠鼓膜穿刺注入水浴加熱滅活的肺炎鏈球菌，造模成功率為71％；采用經(jīng)栗鼠聽(tīng)泡鉆孔注入甲醛滅活的流感菌，造模成功率為100％。

　　2．小鼠免疫反應分泌性OME動(dòng)物模型制作動(dòng)物給予1.2mg卵清蛋白溶于0.6ml磷酸鹽緩沖液(PBS)，以5.14mg氫氧化鋁為免疫佐劑行腹腔注射，每周1次，連續2周，此為全身致敏階段；2周后，麻醉小鼠，無(wú)菌將15μl卵清蛋白經(jīng)鼓膜前下方注入鼓室，24小時(shí)后小鼠再次麻醉，觀(guān)察鼓膜，并重復注射第2次，此為耳內激發(fā)階段，造成分泌性中耳炎模型。

　　3．大鼠分泌性OME動(dòng)物模型建立  選健康大鼠，手術(shù)暴露聽(tīng)泡。聽(tīng)泡內注入330μl濃度為1mg/ml的脂多糖(LPS)，或者聽(tīng)泡內注入纖維蛋白封閉劑(fibrin sealant)后再注入30μl濃度為1mg/ml LPS。制作大鼠的OME模型時(shí)，使用聽(tīng)泡內先注入纖維蛋白封閉劑再注入LPS的方法較單純聽(tīng)泡內注入LPS的方法成功率高，OME的病程遷延時(shí)間長(cháng)。

　　【模型特點(diǎn)】OME是以中耳積液、聽(tīng)力下降為主要特征的非化膿性炎癥，因此，無(wú)論采用何種方法造模，成功的OME動(dòng)物模型必須具備如下特征：①中耳出現積液；②積液培養無(wú)活的病原微生物；③鼓室壓力改變和(或)ABR反應閾提高；④中耳組織出現非化膿性炎癥病理改變。常用的評判指標：①耳鏡檢查：觀(guān)察鼓膜顏色(如變暗、呈淡黃色、棕紅色、琥珀色等)、形狀(內陷、膨隆)及活動(dòng)度的改變；②聲導抗檢查鼓室圖呈平坦型(B型)或低峰型，鼓室負壓(C型)/腦干誘發(fā)電位引不出，閾值升高或波峰分化不良。

　　【模型評估和應用】主要看OME癥狀出現的類(lèi)型和程度，評估的指標主要是：鼓膜改變(顏色、光錐、活動(dòng)和薄厚)；中耳壓力、鼓室積液、鼓室黏膜改變(增生、水腫和炎癥滲出)，以及聽(tīng)骨鏈的活動(dòng)度；內耳改變主要是炎癥浸潤入耳蝸，導致感音神經(jīng)性聽(tīng)力損失。