(1)復制方法 首先將透析袋放入0.5mol/L的EDTA溶液中,煮0.5h后棄去溶液,更換蒸餾水再煮3次,然后貯存在含0.01%疊氮鈉的蒸餾水中,4℃保存備用。取體重為1.5~2.0kg的新西蘭兔,用麻醉方法急性處死后,剝離其口腔黏膜組織,用勻漿器制備勻漿后,超聲波震蕩,低溫離心,保留沉淀物,取上清液再作透析以濾過(guò)小分子物質(zhì),將大分子蛋白留于透析袋內。透析過(guò)程同法反復5次,最后將袋內物質(zhì)冷凍干燥,獲得粉末狀蛋白作為抗原,置-70℃低溫冰箱備用。取1.5~2.0kg體重的新西蘭兔,用預先提取的口腔黏膜蛋白12.5mg溶于0.5ml磷酸緩沖液中,再加入0.5ml的完全弗氏佐劑呈乳化液。在家兔脊柱兩側皮內注射上述組織乳化液1ml,共注射20點(diǎn)。每隔2周同法注射1次,共注射5次。于不同時(shí)間切取口腔黏膜作常規病理組織切片光鏡下檢查。
(2)模型特點(diǎn) 造模早期模型兔即開(kāi)始局部黏膜充血,繼而發(fā)生潰瘍,于第2次注射抗原后的第8日起,動(dòng)物口腔黏膜均可出現潰瘍。潰瘍病變多發(fā)生在動(dòng)物的上、下唇,其次是牙齦和口底黏膜。潰瘍直徑為1~5mm,主要呈圓形或橢圓形,邊緣較整齊,其表面覆蓋著(zhù)一層黃色假膜;模型制作過(guò)程中潰瘍一般2~3d可自行愈合,后又復發(fā)。鏡下口腔黏膜病理組織學(xué)觀(guān)察顯示,黏膜上皮壞死脫落,潰瘍表面覆蓋有大量中性粒細胞和纖維素樣滲出物,潰瘍底部小血管擴張充血,并伴有中性粒細胞、淋巴細胞及單核細胞浸潤。
(3)比較醫學(xué) 人類(lèi)復發(fā)性口腔潰瘍(Recurrent Aphthous Ulcer, RAU)是臨床上最常見(jiàn)的口腔黏膜疾病,其發(fā)病原因至今尚不明確。近年來(lái)大多數研究報道均認為,其與機體免疫(尤其是自身免疫)有關(guān),因此建立理想而合適的復發(fā)性口腔潰瘍(RAU)動(dòng)物模型意義重大。由于受到人們對 RAU病因學(xué)方面認識的限制,迄今為止臨床上尚無(wú)治療RAU的特效藥及方法。采用免疫學(xué)方法復制的本模型,其疾病發(fā)作特點(diǎn)、口腔黏膜病理?yè)p傷與臨床上人類(lèi)RAU極其相似,鏡下均表現為非特異性炎癥。本方法建立的免疫性RAU模型,其制作機制可能是特異性蛋白作為抗原進(jìn)入機體后,產(chǎn)生了特異性抗體而誘發(fā)動(dòng)物口腔黏膜免疫反應的結果。本模型可用作人類(lèi)RAU發(fā)病機制及藥物治療方面的實(shí)驗研究。