(1)復制方法  健康大鼠，體重為200～250g，雌雄不拘，經(jīng)反復行為檢測確認其無(wú)旋轉行為。以水合氯醛(350～400mg/kg體重)或戊巴比妥鈉(50～60mg/kg體重)經(jīng)腹腔注射麻醉，剪去頭部毛發(fā)，將大鼠固定于三維腦立體定向儀上，采取顱平位。手術(shù)區域皮膚消毒，皮正中切口，暴露前囟。將6-羥多巴胺(6-OHDA)注射進(jìn)入腦內黑質(zhì)－紋狀體的不同部位(見(jiàn)下述)，于術(shù)后7、15、22、30及60d按0.05mg/kg體重的劑量分別皮下注射苯丙胺及阿樸嗎啡進(jìn)行旋轉行為檢測。行為學(xué)檢測結束后，動(dòng)物麻醉后開(kāi)胸，用生理鹽水100～200ml左心室沖洗，然后以4℃的4％多聚甲醛(pH=7.4，0.1mol/L PBS)300ml做灌注前固定。迅速斷頭取腦，將腦浸入4％多聚甲醛4℃過(guò)夜，再移入含30％蔗糖PBS中4℃過(guò)夜(脫水)，直至腦組織沉入容器底部，于紋狀體(前囟后0.2mm)及黑質(zhì)區(前囟后5.5mm)行連續冰凍橫切片，片厚30μm，每間隔5張取一片作為切片。進(jìn)行神經(jīng)元尼氏體染色及免疫組織化染色，作TH免疫細胞化學(xué)染色，觀(guān)察大鼠黑質(zhì)紋狀體多巴胺細胞的損毀情況。

　　1)黑質(zhì)致密體部MPD  于前囟后4.4m，矢狀縫旁1.3mm，顱骨下8.5mm為注射點(diǎn)，使用微量注射器注射6- OHDA 8μg(6-OHDA溶于0.2％的抗壞血酸生理鹽水中)，注射速度2μg/(μl·min)，注射完畢留針10min。退針速度為1mm/min，以防藥液溢出。術(shù)畢大鼠連續5d肌肉注射慶大霉素以防感染，每只2萬(wàn)U/d。

　　2)黑質(zhì)致密體旁部MPD  使前囟與后囟在同一平面，選擇黑質(zhì)致密體旁為注射點(diǎn)(人字縫前3.5mm，矢狀縫旁2.3mm，硬膜下6.8mm)，6-OHDA注射量及其他處理方式同黑質(zhì)致密體部MPD。

　　3)紋狀體區MPD  調節門(mén)齒鉤與耳間線(xiàn)處于同一平面，以前囟、矢狀縫、硬膜為標志，以下三點(diǎn)為注射點(diǎn)(AP＋1.0, ML-3.0, DV-5.0, TB-0.0)、(AP-0.1, NIL-3.7， DV-5.0, T1-30.0)及(AP-1.2，ML-4.5，DV-5.0，TB-0.0)，分別注入6-OHDA 7μg，注射速度及其他處理方式同黑質(zhì)致密體部MPD。

　　4)動(dòng)物行為檢測  造模鼠于術(shù)后7、15、22、30及60d分別給予苯丙胺及阿樸嗎啡進(jìn)行旋轉行為檢測。苯丙胺誘導旋轉行為陽(yáng)性時(shí)，動(dòng)物以前肢為支撐點(diǎn)，頭尾相接，身體彎曲成環(huán)狀，向損傷同側旋轉。阿樸嗎啡誘導旋轉行為陽(yáng)性時(shí)，大白鼠且多以旋轉側前肢為支撐點(diǎn)向損傷對側的原地轉動(dòng)。動(dòng)物的旋轉行為達到或超過(guò)了7次/min，持續時(shí)間達30min，作為PD癥狀的定量指標。一般連續4周用阿樸嗎啡誘發(fā)旋轉次數保持穩定，即表示損毀作用已達穩定，可供試驗之用。

　　(2)模型特點(diǎn)  6-OHDA為選擇性DA神經(jīng)元化學(xué)損毀劑。當注射至大鼠紋狀體或黑質(zhì)后可被DA神經(jīng)元末梢或胞體的膜轉運體主動(dòng)攝取到細胞內，經(jīng)氧化生成神經(jīng)毒物，如羥自由基和醌類(lèi)物質(zhì)，造成線(xiàn)粒體呼吸鏈NADH脫氫酶、細胞色素C氧化酶的阻滯，使DA神經(jīng)元變性、死亡，黑質(zhì)一紋狀體DA系統功能減退而產(chǎn)生類(lèi)似于PD的癥狀。一般注射后24h出現DA能神經(jīng)元變性，2～3d后出現紋狀體 DA含量減少，成功的模型DA含量減少80％～90％。行為方面表現為身體向損毀側偏斜。

　　單側損毀后，通過(guò)外周給予促DA制劑可使動(dòng)物產(chǎn)生旋轉行為。DA受體激動(dòng)劑(如阿樸嗎啡、溴隱亭等)可引起動(dòng)物向健側旋轉，這是因為損毀側黑質(zhì)一紋狀體DA系統破壞后，突觸后膜的DA受體因失神經(jīng)支配而敏感性增高，此時(shí)應用DA受體激動(dòng)劑使損傷側興奮作用占優(yōu)勢而產(chǎn)生向健側旋轉。與此相反，若給予促DA釋放制劑(如苯丙胺)則使動(dòng)物向損毀側旋轉，因為損毀側神經(jīng)末梢可供釋放的DA含量遠低于健側，因而健側DA效應占優(yōu)勢。通過(guò)記錄一定時(shí)間內藥物誘發(fā)的旋轉次數，可對PD癥狀的嚴重程度進(jìn)行量化。此外，根據藥物誘發(fā)的旋轉方向，可以判斷藥物是通過(guò)突觸前機制(即促釋放)或突觸后機制使DA受體興奮，即區分是間接還是直接的DA受體激動(dòng)劑。

　　(3)比較醫學(xué)  6-OHDA單側損毀制備的旋轉模型是目前用得最多的PD模型之一，在數周內逐漸引起黑質(zhì)一紋狀體DA系統逆行性變性，可部分模擬DA能神經(jīng)元漸進(jìn)性變性的特點(diǎn)。其病理、生化方面的表現同人類(lèi)PD有不少相似之處，如黑質(zhì)DA能神經(jīng)元變性、死亡、缺失，膠質(zhì)細胞增生，黑質(zhì)和紋狀體TH活性及DA含量降低。另一突出的優(yōu)點(diǎn)是藥物誘發(fā)的旋轉行為的量化，是評價(jià)抗PD藥物療效穩定可靠的指標。缺點(diǎn)是該模型仍屬急性損傷模型，不能模擬 PD慢性進(jìn)行性病程特點(diǎn)，病理方面也與人類(lèi)PD有一定差異(如無(wú)細胞內Lewy小體)。此模型可用于PD的發(fā)病機制及藥物療效判定、細胞移植治療、基因治療、神經(jīng)保護治療方面的研究。