重度聯(lián)合免疫缺陷(SCID) 小鼠是美國B(niǎo)osma證實(shí)的屬CB - 17 近交系小鼠第16 號常染色體發(fā)生隱性突變基因(SCID) 的突變型小鼠1 。純合的SCID 鼠基因導致小鼠幾乎完全喪失T 和B 淋巴細胞的功能, 人們便將這類(lèi)小鼠廣泛用于免疫學(xué)、腫瘤學(xué)的研究。急性早幼粒細胞白血病(APL) 在誘導分化劑全反式維甲酸作用下可向正

　　常粒系分化,臨床上用全反式維甲酸(ATRA) 治療APL 雖能引起完全緩解,但APL 的發(fā)病機制仍不太清楚,因此,建立一個(gè)穩定的動(dòng)物模型用來(lái)研究APL 誘導分化的機制有重要的意義。

　　1 　材料與方法

　　1. 1 　材料

　　1. 1. 1 　人白血病細胞系　人急性早幼粒白血病HL - 60 細胞株從中南大學(xué)腫瘤研究所引進(jìn),用含10 %小牛血清(杭州四季青) 的RPMI - 1640 培養基(Gibco 公司產(chǎn)品) ,5 %CO2 ,37 ℃培養。

　　1. 1. 2 　SCID 小鼠　16 只,雄性,3～4 周齡(購于上海中國科學(xué)院實(shí)驗動(dòng)物中心) ,小鼠在層流架內帶蓋鼠盒中飼養(符合SPF 標準) 。室內空氣經(jīng)中效過(guò)濾, 飲用水為加少量食鹽的滅菌雙蒸水, 標準顆粒飼料加維生素C、雞蛋, 墊料及一切與鼠接觸物品均滅菌處理。分為兩組,每組8 只,每只分別腹腔或靜脈直接接種5 ×106 個(gè)細胞。

　　1. 2 　方法

　　1. 2. 1 　移植　SCID 小鼠移植前未作任何處理,取對數生長(cháng)期HL - 60 細胞用于移植, 每只鼠以尾靜脈注射或腹腔接種5 ×106 個(gè)細胞。

　　1. 2. 2 　外周血白細胞計數及分類(lèi)　接種前和接種1、2、3、4 周或病程后期, 分別取尾靜脈血檢測。

　　1. 2. 3 　形態(tài)學(xué)觀(guān)察　取外周血,吉姆薩染色,油鏡下觀(guān)察細胞形態(tài),每片計數200 個(gè)細胞,按早幼粒、中幼粒、晚幼粒、桿狀核及分葉核細胞分類(lèi)計數,計算早幼粒細胞的比例。

　　1. 2. 4 　病理學(xué)檢查　瀕死動(dòng)物進(jìn)行病理檢查,取肝、脾、腎、骨、心臟、肺、肌肉、睪丸及腫瘤實(shí)體,以10 %甲醛固定48 小時(shí)以上,常規石蠟切片,鏡檢。

　　1. 2. 5 　染色體核型分析　用標準的染色體染色技術(shù)將體外培養的HL - 60 細胞和來(lái)自SCID 小鼠腹瘤組織細胞和血液細胞,按常規方法做成染色體標本, 即將體外培養的HL - 60 細胞和來(lái)自SCID 小鼠腹瘤組織細胞和血液細胞加含10 %小牛血清的RPMI - 1640 培養基在37 ℃、5 % CO2 飽和濕度的CO2 孵箱中培養45～66 h ,加終濃度為0. 4 的秋水仙素阻滯細胞于分裂中期,然后收集細胞、低滲、固定、滴片、G顯帶、鏡檢。