目的    探討間充質(zhì)干細胞泌的外泌體是否通過(guò) miR-21-5p 調節心臟自噬并影響心肌缺血大鼠的心臟功能。

　　方法    在體外,觀(guān)察 MSCs-Exos 對 H2O2 刺激 H9C2s 的影響;通過(guò) CCK-8 測定法檢測細胞活力;流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡;熒光顯微鏡檢測細胞中活性氧( reactive oxygen species,ROS)的產(chǎn)生;免疫印跡分析自噬相關(guān)蛋白和熒光 GFP-LC3 測定自噬體形成。在大鼠 MI/ RI 模型中,通過(guò) TUNEL 測定、免疫組織化學(xué)染色及超聲心動(dòng)圖分別檢查了 MSCs-Exos 對細胞凋亡、心肌 LC3B 表達和心臟功能影響。

　　結果    在體外實(shí)驗中,MSCs-Exos 顯著(zhù)提高了 H2O2 刺激的 H9C2 細胞活力(P<0. 05),降低了 ROS 的產(chǎn)生和細胞凋亡率(P<0. 05)。 而與 H2O2 +MSCs-Exos 組相比,H2O2 +MSC-ExossimiR-21-5p組細胞活力顯著(zhù)降低(P<0. 01), ROS 的產(chǎn)生和細胞凋亡率顯著(zhù)增加(P<0. 01)。 Western blot 檢測顯示:與 H2O2 組相比,H2O2 +MSCs-Exos 組 LC3B- Ⅱ/ LC3B-Ⅰ和 LC3B-Ⅱ的表達顯著(zhù)增強(P<0. 01),p62 的表達顯著(zhù)降低(P<0. 01);與 H2O2 +MSCs-Exos 組相比, H2O2+MSC-ExossimiR-21-5p組的 LC3B-Ⅱ/ LC3B-Ⅰ和 LC3B-Ⅱ的表達顯著(zhù)降低(P<0. 05),p62 的表達顯著(zhù)增強(P< 0. 05)。 自噬通量結果:與 H2O2 組比較,H2O2 +MSCs-Exos 組細胞中存在的 GFP-LC3 點(diǎn)數增加;而與 H2O2 +MSCs- Exos 組相比,H2O2+MSC-ExossimiR-21-5p組細胞中存在的 GFP-LC3 點(diǎn)數顯著(zhù)降低(P<0. 05)。 在體內,RT-qPCR 分析結果顯示:在 MSCs-Exos 中和 MI/ RI 后心肌組織中 miR-21-5p 的表達均呈正相關(guān)性。 與其他各組相比,MI/ RI + MSCs-Exos 組的 LC3B 表達顯著(zhù)增強(P<0. 01);心肌細胞凋亡顯著(zhù)減少(P<0. 01);分數縮短率(FS%)和左心室射血分數(LVEF)均顯著(zhù)提高(P<0. 05)。

　　結論    MSCs-Exos 可通過(guò)調節心肌自噬改善 MI/ RI 大鼠的心臟功能,其作用機制可能與 miR-21-5p 轉移有關(guān)。