目的:評估登革熱病毒的實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法,該方法用于檢測登革熱小鼠模型的關(guān)鍵指標。
方法:首先,選擇合適的特異性引物和探針,通過(guò)分子生物學(xué)方法制備質(zhì)粒標準品,并優(yōu)化PCR系統和反應條件。接下來(lái),我們將評估實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法的敏感性,特異性和穩定性。驗證了該方法對登革病毒感染小鼠血清和組織樣品的適用性。該結果證實(shí)了一步一步實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法。此方法更靈敏,最小檢測線(xiàn)為49.6拷貝/μL。該方法是高度特異性的,并且沒(méi)有非特異性擴增。穩定性和樣品Ct值都很好。所有標準偏差均小于0.5、CV小于5%。登革熱病毒感染的小鼠模型樣品的測試結果符合實(shí)驗的預期。
結論:QRT-PCR方法可作為登革熱小鼠模型病毒定量檢測和評估的重要指標檢測方法。