RNA提取心得 

   1.最好新鮮組織，這樣RNA提取的效果比較好，這是肯定的。 

   2.如果不是新鮮的（最好在半年之內，-80°或者液氮中凍存的）組織，注意不要反復凍融，從冰凍狀態(tài)拿到0-4°，注意不要拿到常溫，待組織解凍后，用DEPC泡過(guò)的剪刀剪一小塊組織，稱(chēng)重后，放到預冷的勻漿器中，然后加入一定量的TRIZOL試劑，然后勻漿。注意：速度不要太快，要勻一會(huì )挺一會(huì )，否則由于摩擦產(chǎn)熱，RNA遇熱會(huì )加速降解。如果一次做多個(gè)標本的RNA提取，也要這樣做，更不能急。后面的步驟和細胞RNA提取一樣。 

二 培養細胞的RNA提取 

懸浮細胞，直接用吸管或者加樣槍吹打評壁，以使細胞基本可以被吹下來(lái)。然后離心去上清，不需要用PBS洗。 

   2.然后將少量細胞懸液轉移到預冷的DEPC泡過(guò)的1.5毫升EP管中，然后加入一定量的TRIZOL(細胞多的話(huà)加1毫升，細胞少的話(huà)加0.5毫升就可以)，然后用槍頭吹打混勻5-10分鐘。（如果有時(shí)間就繼續往下做，如果沒(méi)有時(shí)間，可以把加了TRIZOL后的細胞裂解液凍存到-80°，用的時(shí)候提取和新的提取的效果一樣。）在冰上操作。 

   3.上面的混勻5-10分鐘，基本可以使細胞裂解，然后可以進(jìn)行下面的步驟，詳細的步驟我就不介紹了。 

我只介紹一些需要注意的地方。 

   1. 一定要注意冰上操作，低溫離心。

   2. 戴口罩和勤換手套，去任何東西都要帶著(zhù)手套去取。 

   3. 每次去器材的時(shí)候都要用鑷子去夾，鑷子要在酒精燈上燒一下。 

   4. 所有的器材都要經(jīng)過(guò)DEPC浸泡后高壓后才可以使用，所需要的氯仿，酒精，異丙醇等都保證沒(méi)有被RNA酶污染，不能用沒(méi)有泡過(guò)DEPC的槍頭去提取液體，一定要用DEPC浸泡過(guò)的槍頭去吸，如果發(fā)現試劑有可能被污染了，要立即更換。 

   5. 吸取上清一定不要吸到中間層的蛋白，如果吸到蛋白一定要重新用氯仿抽提，因為，吸到的蛋白很可能會(huì )對RNA產(chǎn)生降解作用。一定要少吸，不要貪多，RNA提取不要求量，更多的要求質(zhì)。 

   6. 最后用75%的酒精洗一次就可以，盡量減少RNA提取時(shí)間。 

   7. 最后一步，用DEPC水溶解RNA，不要用太多的體積，以保證RNA的濃度。