慢病毒感染方法
發(fā)布人：admin
瀏覽次數：1216
發(fā)布時(shí)間：2016-11-30
材料和試劑
1. 6 cm細胞培養皿(Fiosher).
2. 人類(lèi)或小鼠細胞系，細胞試驗所需要的生長(cháng)培養基。
3. 凝聚胺(海美溴銨; Sigma H 9268)
4. 合適的選擇性抗生素。
儀器
1. 細胞培養箱
步驟
慢病毒感染方法應該根據不同的細胞系和以細胞為基礎的試驗來(lái)進(jìn)行優(yōu)化。例如，下列的參數應該在大規模的感染之前進(jìn)行優(yōu)化，以確定一個(gè)實(shí)驗的最適條件：
1) 細胞種植密度
2) 慢病毒的數量
3) 嘌呤霉素的濃度
4) 感染時(shí)間
2. 在6cm培養皿中種植適當密度的細胞，每孔體積6ml。
1) 貼壁細胞：轉染前1天種植細胞
2) 懸浮細胞：轉染當天種植細胞，培養基中需要含有凝聚胺。
3. 細胞中加入病毒:
1) (貼壁細胞):棄掉培養基，加入新鮮的含有凝聚胺的培養基 ?；蛘?，棄掉部分培養基并且補充含有凝聚胺的培養基。調整體積和凝聚胺的濃度，使得凝聚胺的終濃度為8ug/ml。
4. 病毒感染:
1) 孵育細胞過(guò)夜。
2) 感染后24h更換培養基。棄掉培養基，換入6ml新鮮的培養基。如果需要抗生素選擇，則使用含有抗生素的新鮮培養基。
注意：嘌呤霉素的濃度應該根據每種細胞系來(lái)進(jìn)行優(yōu)化；常用的濃度范圍為： 2-5 μg/mL.
5. 孵育細胞，根據需要每隔幾天更換培養基(如果需要，則要含有抗生素) 。孵育時(shí)間的長(cháng)短主要依賴(lài)于感染后的試驗。
