本方法無(wú)需傳統 TRIZOL 提取方法的相分離,而且不需要使用任何有毒有害的試劑(例如氯仿),7 分鐘就可完成整個(gè)操作步驟并且可以提取到含 microRNA 的總 RNA。
1.先用 TRIZOL 或類(lèi)似的試劑裂解樣品
本表格針對各種樣品列出了參考用量,詳細用量請參見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
a)細胞樣品
針對細胞重懸液,添加 3 倍體積的 TRIZOL 到 1 體積的細胞懸液中。
b)組織樣品
C)液體樣品
2.純化過(guò)程
a) 添加等體積的 100% 無(wú)水乙醇到TRIZOL的裂解物中混合。
b) 把混合物加到 ZYMO-SPIN IIC 柱上并且套在收集管里,離心,去除濾出液。
c) 可以采用柱上消化的 DNA 的步驟去除 DNA.(可選)
d) 添加 Direct-zol wash buffer 400 微升到柱子上 離心,去除濾出液。
e) 添加 RNA wash buffer 700 微升到柱子上 離心,去除濾出液。
f ) 直接添加 50 μl of DNase/RNase-Free Water 到柱基質(zhì)上,下面套上一個(gè)干凈的 1.5 毫升 EP 管離心收集 RNA.
(本文轉載丁香通)