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miRNA Northern Blot實(shí)驗技術(shù)應用

       MicroRNA(miRNA)是真核生物中一類(lèi)長(cháng)度約為20-25nt(核苷酸)的非編碼單鏈RNA分子,在生物進(jìn)化過(guò)程中高度保守,約占整個(gè)基因組基因總數2%。大量研究表明,miRNA在多種生物過(guò)程中起關(guān)鍵作用,包括細胞的發(fā)育、分化、增殖和凋亡等;并且功能研究已證實(shí)多種miRNA分子與腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程相關(guān),miRNA具有類(lèi)似于致癌基因或抑癌基因的作用。


       最早被發(fā)現的兩個(gè)miRNAs——lin-4 and let-7被認為是通過(guò)不完全互補結合到目標靶mRNA3'非編碼區端,以一種未知方式誘發(fā)蛋白質(zhì)翻譯抑制,進(jìn)而抑制蛋白質(zhì)合成,阻斷mRNA的翻譯。也有miRNA可以與目標靶基因完全互補,從而抑制基因的表達,提示miRNA可能包含和 siRNA類(lèi)似的作用方式。


       隨著(zhù)miRNA研究的不斷深入,各種研究方法層出不窮,包括miRNA芯片、Real time-PCR、Northern Blot、RNA酶保護實(shí)驗等等。而在這些方法中最經(jīng)典方法的當屬miRNA Northern Blot,miRNA Northern Blot具有結果直觀(guān)、可靠等方面的優(yōu)勢,因此許多SCI雜志要求miRNA方面的研究需提供Northern Blot實(shí)驗結果。


       美國Signosis的miRNA Northern Blot檢測試劑以其簡(jiǎn)便的實(shí)驗操作步驟為廣大研究人員所稱(chēng)道,特別是基于專(zhuān)利技術(shù)開(kāi)發(fā)的高敏miRNA Northern Blot檢測試劑,因其能夠檢測到低豐度的miRNA而成為美國Signosis的明星產(chǎn)品。。使用美國Signosis開(kāi)發(fā)的miRNA Northern Blot試劑發(fā)表了很多高水平的SCI文章,下面通過(guò)對其中幾篇文獻的分析來(lái)向大家詳細介紹美國Signosis miRNA Northern Blot檢測試劑。


       1、文獻一:Effect of miR-23 on Oxidant-Induced Injuryin Human Retinal Pigment Epithelial Cells

       該文章中,作者使用miRNA Northern Blot檢測試劑檢測正常以及AMD病變的RPE細胞中miR-23a的表達情況。如上圖所示,實(shí)驗結果條帶清晰,明顯可見(jiàn)在不同樣本中miR-23a的表達差異。


       2、文獻二:Functional analysis of microRNAs in humanhepatocellular cancer stem cells

       使用miRNA Northern Blot檢測試劑分析不同樣本中miR-181a和let-7a的表達情況。從上圖可以看到,兩種miRNA的表達量在正常HepG2細胞中表達量很低,而在N-LSC、HSC-SR、HSC-DF中表達量依次上升。從圖中可以看到,即使是使用普通的miRNA Northern Blot檢測試劑,也可以清楚地檢測到低表達的miRNA。


       3、文獻三:Characterization of the stress associated microRNAsin Glycine max by deep sequencing

       該文章使用的是Signosis高敏miRNA Northern BlotmiRNANorthern Blot檢測試劑,檢測了不同樣品中的多個(gè)miRNA表達,結果中可以清晰地看到低豐度的miRNA條帶,同時(shí)高表達miRNA條帶形狀也很美觀(guān),沒(méi)有聚集成一團。Signosis高敏miRNA Northern Blot檢測試劑可以清楚分辨miRNA表達差異,特別在檢測靈敏度較普通的高出1到2個(gè)數量級。


       從上面三篇文獻的Northern Blot實(shí)驗結果來(lái)看,Signosis研發(fā)的普通及高敏miRNA Northern Blot檢測試劑效果是穩定的。整套試劑包含實(shí)驗所有組分,客戶(hù)只需相應的儀器即可完成實(shí)驗所有步驟??梢郧逦臋z測到低豐度miRNA,同時(shí)也不會(huì )影響到對高豐度miRNA的檢測。


       (本文轉載丁香通)

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