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白細胞介素8(IL- 8)檢測實(shí)驗


    Il-8是一種分子量為8~10kD的多肽,對嗜中性粒細胞,T淋巴細胞、嗜鹼性粒細胞具有趨化作用,并可激活嗜中性粒細胞,是一種重要的炎癥介質(zhì)。在嚴重感染病人的血清中、炎癥局部滲出液中都可檢測到高水平的IL-8。

    一、實(shí)驗方法:夾心法ELISA


    二、實(shí)驗原理:采用兩株識別不同表位的抗IL-8單克隆抗體,其中一株(4D7)作為包被抗體,以識別和結合待檢標本中的IL-8,另一株作為酶標抗體,與結合于包被抗體的IL-8的另一個(gè)表位結合并催化底物顯色。


    三、實(shí)驗材料:抗體、標準品、ABTS


    四、試劑、試劑盒:緩沖液、PBS


    五、儀器、耗材:ELISA板


    六、實(shí)驗步驟:

    1.  包被
    pH9.5 碳酸鹽緩液稀釋4D7單克隆抗體粗提γ球蛋白至1 μg/ml,加入96
孔板,100 μl/孔,放4 ℃,36 小時(shí)。


    2.  封閉
    0.1 %吐溫PBS(Buffer A)沖洗96孔板三次,加3 %BSA Buffer A(Buffer B)
200 μl/孔,放37 ℃,1 小時(shí)。

    3.  加待檢樣品
    Buffer A 沖洗96孔板三次,加待檢樣品及Buffer B 稀釋的標準品100 μl/
孔,放37 ℃,3 小時(shí)。

    4.  加酶標抗體
    Buffer A沖洗96孔板五次,3 %PEG Buffer A稀釋酶標抗體至1∶800,加
入96孔板,100 μl/孔,放37 ℃,1 小時(shí)。

    5.  顯色
    Buffer A沖洗96孔板五次,pH5.4檸檬酸緩沖液溶解底物(ABTS)),0.2 mg/
ml,加3 %H2O2,2 μl/ml,加入96孔板,100 μ/孔,室溫下或37 ℃顯色。
    七、注意事項:
    1.  待檢標本如為血清,應采用一次性容器,血液采集后盡快(6小時(shí)以?xún)龋┓蛛x血清。

    2.  封閉液或抗體稀釋液應新鮮配制或凍存。
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