天氣漸熱，心情也難免有些煩躁。這樣一來(lái)WB也出鬼了，膠片上不時(shí)的出現極高的背景，整張膜上都是黑的，看上去好像是在墻壁上潑墨后留下的污漬似的。

       那這是跑膠的問(wèn)題？

       還是轉膜？

       顯影？    ……？

       重復……

       重復……

       重復，再重復……

       直到某天早上我咬牙切齒的盯著(zhù)那幾條藍色的帶往下跑的時(shí)候，驀然發(fā)現：濃縮膠漏了！從某個(gè)梳孔的角落處，溴酚藍正直接穿過(guò)濃縮膠，進(jìn)入濃縮膠和分離膠的交界處，并順著(zhù)交界線(xiàn)平展開(kāi)來(lái)，滲透到整個(gè)交界線(xiàn)上。顯然這將直接導致樣品在整個(gè)膜里面分布，造成高背景。因為漏的樣品分布相對均勻，所以麗春紅染色是看不出來(lái)區別的。

       似乎是找到原因了。為什么會(huì )這樣呢？很顯然：拔梳子的時(shí)候太快，帶動(dòng)了濃縮膠?！靶募背圆涣藷岫垢甭?，呵呵！于是馬上重新制膠，很小心的拔出梳子?？粗?zhù)那漂亮的梳孔，我得意的點(diǎn)上了樣。

       不料，這一次又漏了！而且比上一次還要嚴重，幾乎所有的梳孔都漏了，在濃縮膠里面形成了一個(gè)藍色蜘蛛網(wǎng)似的圖案。我被擊潰了。同樣的溶液，同樣的玻片，同樣的人；更精確的取液，更小心的操作~~~咋會(huì )比上次更差呢？呆坐了幾分鐘（好像有一個(gè)世紀那么長(cháng)）~~~到底誰(shuí)動(dòng)了我的濃縮膠？??？??？??？??？！

       從刑偵角度來(lái)說(shuō)，兇手應該是與被害人有直接或者間接接觸的。和濃縮膠接觸的東西有那些？玻片，梳子，SDS-PAGE Buffer，可能還有我的上樣針頭？

       當我想到最后一樣的時(shí)候，答案找到了：分離膠。

       很簡(jiǎn)單：我沒(méi)有等分離膠完全聚合，而是在其界面剛剛出現的時(shí)候就開(kāi)始制備濃縮膠。大家知道，分離膠在聚合之后它的體積是會(huì )有所縮小的——雖然其液面只有1-2mm的降低（在我的BIO-RAD 的0.75mm kit上），但是這足以將兩層膠撕開(kāi)。而濃縮膠因為濃度比較?。ǜ洠┒菀资苡绊?。同時(shí)這也解釋了為什么第二次我匆匆忙忙制備的膠更容易漏了。

       于是第三次制備分離膠膠，等上1hour再上濃縮膠……這一次終于不漏了，而WB的結果也恢復了以前的干凈整潔。接下來(lái)的幾個(gè)蛋白也跑的順順利利的，感覺(jué)就像是：“我就抓住蒼蠅擠破它的肚皮把它的腸子扯出來(lái)再用它的腸子勒住它的脖子用力一拉，呵－－！整條舌頭都伸出來(lái)啦！我再手起刀落，嘩－－！整個(gè)世界都清凈了……”

       嘿，心情不錯，特發(fā)帖希望能夠提示一下有類(lèi)似問(wèn)題的朋友。依然是那句話(huà)：“心急吃不了熱豆腐”?。。?！

       （本文轉載丁香通）