溶血空斑試驗，又稱(chēng)空斑形成細胞（Plague Forming Cell, PFC）試驗，是一種體外檢測抗體形成細胞的方法。

小室液相法

實(shí)驗方法原理     

溶血空斑試驗，又稱(chēng)空斑形成細胞（Plague Forming Cell, PFC）試驗，是一種體外檢測抗體形成細胞的方法。將一定量洗滌過(guò)的綿羊紅細胞注射入小鼠腹腔，四天后將小鼠殺死，取脾臟制成脾細胞懸液，內含抗體形成細胞。然后將脾細胞、綿羊紅細胞，補體混合孵育。由于PFC 所分泌的抗體和綿羊紅血球結合形成抗原抗體復合物，在補體作用下可使紅細胞溶解，于特制的小室內形成肉眼可見(jiàn)的溶血空斑。一個(gè)空斑即代表一個(gè)抗體形成細胞。

實(shí)驗材料       

ICR小鼠

試劑、試劑盒        

綿羊紅血球補體

儀器、耗材     

解剖器械試管吸量管載玻片石蠟盤(pán)酒精燈微量加樣器

實(shí)驗步驟       

1.  小鼠免疫及脾細胞懸液的制備

將5 ％SRBC0.4 ml注射于小鼠腹腔，4 天后拉脫頸椎處死，取出脾臟放在已加入6 ml Hank's液的平皿中。在100 目不銹鋼網(wǎng)上研磨，過(guò)濾混勻，從中吸取1 ml加入試管中，加滿(mǎn)Hank's液混勻，離心1000 rpm，10 分鐘。將沉淀的脾細胞恢復1 ml容積，即為約1×107 /ml濃度的細胞懸液。

2.  制作小室

取無(wú)脂載玻片（75 mm×25 mm）, 平置桌面上。用雙面膠帶在載玻片兩端和中間各粘一條，然后再覆蓋上同樣的載玻片，即形成兩個(gè)小室。將此雙層玻片的一側長(cháng)邊浸入融化的石臘池中以封閉小室的一邊（無(wú)需浸入過(guò)深，以能封閉小室邊緣為準）

3.  小室灌注細胞懸液

取 1×107 /ml脾細胞懸液100 μl

10 ％SRBC 200 μl

新配補體 200 μl

Hank's液 1 ml

混勻后，用尖吸管灌注小室、蠟封、標記、平放于玻片盤(pán)內，置37 ℃孵箱30—45 分鐘。

注意事項        

1.  小室注入液體時(shí)不要留有氣泡。

2.  小室邊緣需用石蠟封嚴。

3.  37℃孵箱孵育時(shí)，必須放平，不可傾斜。

4.  觀(guān)察結果時(shí)，應注意辨別空斑與氣泡的區別，避免將氣泡誤認為溶血空斑。

其他   

一、實(shí)驗結果

觀(guān)察小室內的透明空斑，一個(gè)空斑即代表一個(gè)空斑形成細胞（PFC），即B細胞。