斑點(diǎn)金免疫滲濾測定法（DIGFA）
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發(fā)布時(shí)間：2016-09-20
基本原理
斑點(diǎn)金免疫滲濾測定法是在斑點(diǎn)免疫滲濾測定法基礎上，改用膠體金標記物代替酶，省去底物顯色的步驟。試驗方法是以硝酸纖維素膜（NC膜）為載體，將試劑及標本滴加在膜上，通過(guò)滲濾而逐步反應。全過(guò)程可于數分鐘
內完成，陽(yáng)性結果在膜上呈紅色斑點(diǎn)。
試劑及材料
1. 滲濾裝置：為一塑料小盒（4x3x0.6cm），分為底、蓋兩層，蓋的中央有一個(gè)直徑0.5cm的小孔。盒底充填吸水性較強的墊料，蓋孔下，緊貼墊料放置一片NC膜。緊閉盒蓋，即為滲濾裝置。在孔中的NC膜上點(diǎn)加1-2ml特
異性抗體(一抗)或抗原，室溫自然干燥，保存于放干燥劑的密封塑料袋中備用。
2. 封閉液：含0.2%BSA和0.05%吐溫-20的洗滌液。
3. 洗滌液：50mol/L，pH7.2 PBS。
4. 特異性抗體(一抗)或抗原
5. 金標抗體
操作方法
1. 取出滲濾器，先在小孔的NC膜上，滴加2滴（約100ml）封閉液；
2. 待其滲入盒內，在NC膜上，加待檢標本1滴（約50ml）；
3. 待其滲入盒內，在NC膜上，滴加2滴（約100ml）洗滌液；
4. 待其滲入盒內，在NC膜上，加金標抗體1滴（約50ml），使其與NC膜上吸附的檢品發(fā)生反應；
5. 待其滲入盒內，在NC膜上，滴加2滴（約100ml）洗滌液；
6. 至洗滌液完全滲入盒內
結果觀(guān)察
在小孔NC膜上出現紅色反應時(shí)為陽(yáng)性反應，陰性反應不著(zhù)色。
注意事項
1. 特異性抗體(一抗)或抗原、待檢標本和金標抗體的用量事先都必須應用方陣法確定最適用量。
2. 盒底充填的墊料吸水性要強，否則影響結果。
