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免疫熒光


       1 直接免疫熒光法的操作步驟
       標本的處理:
       石蠟切片經(jīng)脫蠟、梯度酒精脫水后,進(jìn)行抗原修復,然后用0.01M PBST漂洗5min × 3/次;
       ?  2%BSA或10%BSA 37 C濕盒內封閉30min

       ?  抗體染色:


        在標本片上滴加適當稀釋的熒光標記抗體(1:8或1:16稀釋),放在濕盒中,37°C孵育30min;

       ?  0.0lmol/L PBS(pH 7.4) 漂洗5min × 3/次,不時(shí)震蕩(洗去多余游離的熒光素標記的抗體)。

       ?  緩沖甘油封片


         分析純無(wú)熒光的甘油9份+ pH 9.2,0.2M碳酸鹽緩沖液1份配制。

       ?  鏡檢:在熒光顯微鏡下觀(guān)察。

       ?  優(yōu)點(diǎn):方法簡(jiǎn)便、特異性高,非特異性熒光染色少。
       ?  缺點(diǎn):敏感性偏低;而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體。若檢測多種抗原需制備多種相應的熒光標記抗體。
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