具體步驟：

  1. 細胞用預冷的PBS液洗滌2次，最后洗滌完成后吸干PBS液。

  2. 加入預冷的RIPA Buffer（1ml/107個(gè)細胞、6cm培養皿、75cm2培養瓶）。

  3. 刮留細胞：用預冷的細胞刮子將細胞從培養皿或培養瓶中上刮下，將懸液轉入1.5mlEP管中，EP管插冰上，置于水平搖床上緩慢晃動(dòng)15min。

  4. 4℃，14000g離心15min。

  5. 立即將上清液轉移到一個(gè)新的離心管中。

  6. 準備Protein A瓊脂糖，用PBS液洗兩遍珠子，然后用PBS液配制成50%濃度。

  *為避免操作中破壞瓊脂糖珠，減掉移液器槍頭的尖部分。

  7. 每ml總蛋白中加入100ul Protein A瓊脂糖珠（50%），EP管插冰上，置于水平搖床上4℃搖晃10min。

  *目的是去除非特異性雜蛋白，可降低背景。

待續