一、檢測原理

       待測蛋白根據其性質(zhì)（分子量、分子大小、電荷以及其等電點(diǎn)）采用電泳方法進(jìn)行分離，通過(guò)電流將凝膠中的蛋白質(zhì)轉移到聚偏二氟乙烯膜（PVDF）上，利用一抗與抗原特異性結合的原理，以抗體作為探針釣取目的蛋白。

二、樣品處理及上樣

       1、取15-20ug蛋白，加2倍SDS上樣緩沖液7ul，DDW定容至總體積14ul。

         * 上樣總體積一般少于15ul，加樣孔的最大限度可加20ul樣品。

       2、95℃孵育5min，使蛋白變性。

       3、電泳槽內加入足夠的電泳液。

       4、上樣，分子Marker也要一起上樣，用微量進(jìn)樣器貼壁吸取樣品，加樣器槍頭插到加樣孔中緩慢加入樣品。

           *樣品吸出時(shí)不要吸進(jìn)氣泡。加樣太快可使樣品沖出加樣孔，若有氣泡也可能使樣品溢出，加下一個(gè)樣品時(shí)，進(jìn)樣器槍頭需在外槽電泳緩沖液中洗滌3次，一面交叉污染，有條件最好加樣時(shí)一個(gè)樣品換一個(gè)槍頭。