親和層析技術(shù)
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發(fā)布時(shí)間：2017-11-07
親和層析技術(shù)是純化各種生物大分子的有效方法。最初是將抗體作為一種結合劑用于免疫親和層析，根據抗原抗體結合后形成大量多聚體和不溶性基質(zhì)原理來(lái)收集抗原。隨后，利用抗體與惰性微珠共價(jià)交聯(lián),雖然這種反應是一種簡(jiǎn)單的結合，但抗體的活性因交聯(lián)缺乏定位作用或抗體的過(guò)量交聯(lián)而喪失。
通過(guò)研究發(fā)現，抗體與蛋白A或蛋白G微珠共價(jià)交聯(lián)后更容易與抗原結合。將具有良好抗原結合特性，且來(lái)源廣泛的各種單克隆抗體制成免疫親和層析柱，已成為一種實(shí)用和有效的純化方法。
免疫親合層析具有以下特點(diǎn)：
①抗體與其相應抗原結合具有高度親和力和特異性,能大量分離天然狀態(tài)或近似天然狀態(tài)的抗原。
②不是所有的抗體都適用于免疫親和層析，但一旦獲得一種性能良好的抗體，純化過(guò)程就簡(jiǎn)單、快速、可靠。
③可按照不同規模進(jìn)行，半天內即可完成，而且可以獲得其他層析法不可比擬的純化效果。
④經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單的改進(jìn)，免疫親和層析法也可用于純化針對抗原的特異性抗體。
免疫親和層析是一種既簡(jiǎn)單又非常有效的分離抗原的技術(shù)。即將抗體共價(jià)結合到一種惰性的微珠上，然后將微珠與含有待純化抗原的溶液混合。當抗原被交聯(lián)在微珠上的抗體捕獲后，通過(guò)洗滌去除無(wú)關(guān)的抗原，然后用洗脫緩沖液處理微珠，結合的抗原被洗脫，從而得到純化的抗原。如果洗脫條件掌握較好而且比較溫和，純化的抗原仍能保持其天然狀態(tài)。雖然下述的所有實(shí)例都是以蛋白質(zhì)抗原作為研究對象，但凡是能與抗體有效結合的分子都能用這種方法進(jìn)行純化。只需簡(jiǎn)單地改變操作程序，免疫親和層析法同樣也可以用來(lái)分離經(jīng)過(guò)初步純化的抗體。此時(shí)抗原和抗體所起的作用正好相反，抗原共價(jià)交聯(lián)在微珠上，再與抗體結合，然后通過(guò)洗脫，得到純化的抗體。 在條件合適的情況下，應用免疫親和層析法通常只需一次就可以達到1000~10000倍的純化效果。使用性能特別優(yōu)良的抗體，并且掌握好洗脫條件，也可以達到10000倍以上的純化效果。
