二、體外培養細胞的染色體標本制備
1． 體外培養的細胞，在倒置鏡下觀(guān)察到有較多的分裂細胞（傳代后24h，圓形發(fā)亮的細胞）時(shí)，加入秋水仙素溶液，終濃度為0.3μg/ml培養液；
2． 繼續培養3h；
3． 胰酶消化收集細胞至離心管；
4． 離心1000轉/min，離心10min，去上清；
5． Hanks液洗，離心，去上清；
6． 低滲處理：加入0.075mol/L KCl溶液8ml，置37℃恒溫水浴中30min，用吸管稍吹打（同上）；
7． 固定及制片如外周血染色體的制備。
三、注意事項
1． 秋水仙素處理時(shí)間過(guò)長(cháng)，分裂細胞多，染色體短??；反之，則少而細長(cháng),故秋水仙素的濃度及時(shí)間要準確掌握。
2． 固定液應在使用前臨時(shí)配制。
3． 載玻片一定要潔凈，否則染色體分散不好。
4． 染色體分裂指數低：患者處于非常時(shí)期（放、化療期）；培養基營(yíng)養成分不良；培養基pH偏低或偏高；PHA過(guò)量或不足；小牛血清質(zhì)量不高；培養箱溫度偏低；秋水仙素處理時(shí)間過(guò)短。
5．接種的血樣愈新鮮愈好。
6. 培養過(guò)程中，如發(fā)現血樣凝集，可將培養瓶輕輕振蕩，使凝塊散開(kāi)，繼續放回37℃恒溫箱內培養。
附：
Carnoy固定液：
固定液的重要特性是能迅速穿透細胞，將其固定并維持染色體結構的完整性，還要能夠增強染色體的嗜堿性，達到優(yōu)良染色效果。單純的固定液一般難以達到這些要求，因此在實(shí)驗中使用兩種混合的固定液。由于Carnoy首先使用的甲醇和冰乙酸混合液而稱(chēng)其為卡諾氏固定液。Carnoy固定液（甲醇∶冰乙酸=3∶1）每次使用前需臨時(shí)配制，長(cháng)時(shí)間放置影響固定效果，固定時(shí)間15min至24h，冰箱、室溫均可。必要時(shí)可改變甲醇和冰乙酸的比例，冰乙酸比例增加，利于細胞膨脹、染色體鋪展，但易導致細胞破裂、染色體散失。
低滲液（hypotonic solution）
低滲液是指滲透壓和離子強度均低于正常細胞生理條件的溶液，滲透壓低于組織液，與外周血混在一起時(shí)，水分迅速進(jìn)入細胞，使其膨脹，甚至破裂，獲得分散良好的染色體分裂象。常見(jiàn)的低滲液：水、低滲的檸檬酸鈉或氯化鈉、甘油磷酸鉀（0.65mol/L）、氯化鉀（0.075mol/L）等。低滲效果取決于低滲液的化學(xué)組成、低滲的溫度和處理時(shí)間。低滲處理是憑借反滲透作用使細胞膨脹染色體鋪展，同時(shí)可使黏附于染色體的核仁物質(zhì)散開(kāi)，以便能在一個(gè)平面上觀(guān)察所有染色體形態(tài)。實(shí)驗室中一般選用0.075mol/L KCl為低滲液，其優(yōu)點(diǎn)有：①染色體輪廓清楚，可染色性強，染色時(shí)間短。②用于顯帶染色時(shí)能充分顯示帶型特點(diǎn)。低滲處理為37℃，25～30min，以預實(shí)驗條件為準。
Giemsa染液
Giemsa原液配制：稱(chēng)Giemsa粉末0.5g，加幾滴甘油研磨，再加入甘油（使加入的甘油總量為33ml）。56℃中保溫90～120min。加入33ml甲醇，置棕色瓶中保存。使用時(shí)按要求用PBS稀釋?zhuān)话阆♂?0倍。（轉帖）
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