下面以50μg的核酸與25μl轉染試劑,總注射體積200μl,20g小鼠尾靜脈注射為例說(shuō)明。局部注射不用稀釋?zhuān)苯痈鶕枰押怂岷娃D染試劑混合即可使用。
1.核酸的稀釋。將50μg核酸用適量無(wú)內毒素純水稀釋成1μg/μl,加入10%葡萄糖溶液(w/v)50μl,使葡萄糖終濃度為5%,終體積為100μl,充分混勻。
2. 轉染試劑的稀釋。取25μl的EntransterTM-in vivo試劑用50μl的10%葡萄糖溶液稀釋?zhuān)⒂眉兯?5μl補足,得到葡萄糖終濃度為5%,終體積為100μl液體,充分混勻。
3. 轉染復合物形成。立即將稀釋后的轉染試劑加入到稀釋后的核酸溶液中,立即充分振蕩混勻。
4. 室溫靜置15分鐘。配制好的轉染復合物請即配即用,不宜長(cháng)期存放。
5. 動(dòng)物注射。
說(shuō)明:1).尾靜脈注射時(shí)請掌握注射技巧,一般選用遠端1/3處靜脈注射,如感覺(jué)到阻力和輕微隆起,請停止注射,重新尋找靜脈進(jìn)行操作,不要強力推注,否則容易將藥液注射在尾部,導致尾部潰爛。注射完成后移去針頭,按壓針孔10秒以上,防止藥液流出。2).2.5mg/kg的給藥劑量是起始給藥劑量,如果動(dòng)物可以耐受,可以按比例增加劑量,這樣效果更好。3).局部注射,盡可能多注射藥液,有利于提高轉染效果。
6. 基因表達檢測。一般來(lái)說(shuō),根據注射方法和靶器官的差異,12-48小時(shí)后基因表達效果較好。
7. 長(cháng)期給藥。一次給藥檢測的最佳時(shí)間是注射后12-48小時(shí)。如果需要維持長(cháng)期效果,可以采用多次注射的方法,注射頻度一般為每間隔2-3天一次,也可以根據實(shí)驗情況適當延長(cháng)至每7天一次。