1 無(wú)菌培養實(shí)驗室準備（同細胞傳代培養），從CO2培養箱中去除細胞，棄去培養液，加入0.25%的胰蛋白酶消化細胞，棄去胰蛋白酶液，使用新的含10%小牛血清的培養基制成細胞懸液后計數。

      2 按照4×10³細胞/孔接種于96孔板，0.2ml培養基/孔（如果是懸浮細胞，則0.1ml培養基/孔），做傳代培養。設置3個(gè)空白對照孔，只加無(wú)細胞的培養基。

      3 24h后加入待檢藥品，可加入幾種不同濃度的待檢藥品。對照組不加藥，24h時(shí)選取其中3個(gè)孔更換新鮮培養基100ul，加入0.01ml的MTT（5mg/ml）放回37℃孵育4h，之后加入100ul的裂解液，37℃過(guò)夜。

      4 5天后統一在酶標儀上于570nm下檢測，得出OD值（或者加入裂解液后過(guò)夜每天檢測）。以空白對照調節零點(diǎn)。

注意事項：

     1 接種細胞要準確，接種時(shí)要充分使細胞混勻，防止細胞沉淀造成細胞接種不均。

     2 MTT溶液見(jiàn)光后顏色會(huì )逐漸變深，因此在加入裂解液后96孔培養板應避光孵育/處理。

     3 可以在全部MTT實(shí)驗做完后一起上機檢測OD值，但前提是前面已經(jīng)做完了的須避光處理。也可采取加入裂解液后每天檢測一次OD值，但使用的酶標儀應該性能穩定，隔天檢測結果應一致。