劃痕實(shí)驗——作為SCI論文必備的實(shí)驗之一，常用方法有兩種，接下來(lái)中洪小編就帶你們來(lái)看看這兩種方法哪種比較適合你！

實(shí)驗原理：細胞劃痕（修復）法是簡(jiǎn)捷測定細胞遷移運動(dòng)與修復能力的方法，類(lèi)似體外傷口愈合模型，在體外培養皿或平板培養的單層貼壁細胞上，去除中央部分的細胞，然后繼續培養細胞至實(shí)驗設定的時(shí)間，取出細胞培養板，觀(guān)察周邊細胞是否生長(cháng)（修復）至中央劃痕區，以此判斷細胞的生長(cháng)遷移能力。

實(shí)驗通常需設定正常對照組和實(shí)驗組，實(shí)驗組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等的組別，通過(guò)不同分組之間的細胞對于劃痕區的修復能力，可以判斷各組細胞的遷移與修復能力。

一、傳統實(shí)驗方法

實(shí)驗步驟：

將所需的材料進(jìn)行滅菌，包括直尺和marker筆

1、先用marker筆在6孔板背后，用直尺比著(zhù)，均勻的劃橫線(xiàn)，大約每隔0.5~1cm一道，橫穿過(guò)孔。每孔至少穿過(guò)5條線(xiàn)。

2、在孔中加入約5×105個(gè)細胞，具體數量因細胞種類(lèi)不同而不同，接種原則為過(guò)夜后融合率達到100%。

3、第二天用槍頭比著(zhù)直尺，盡量垂至于背后的橫線(xiàn)劃痕，槍頭要垂直，不能傾斜(不同孔之間最好使用同一只槍頭)。

4、PBS洗細胞3次，去處劃下的細胞，加入無(wú)血清培養基。

5、放入37℃ 5% CO2培養箱，培養?？砂?，6，12，24h時(shí)間點(diǎn)取樣，拍照(具體時(shí)間依實(shí)驗需要而定)。  

注意事項： 

1、在用PBS緩沖液沖洗時(shí)，注意貼壁慢慢加入，以免沖散單層貼壁細胞，影響實(shí)驗拍照結果。

2、一般做劃痕實(shí)驗，都是無(wú)血清或者低血清（<2%）否則細胞增殖就不能忽略。  

3、按照6孔板背后畫(huà)線(xiàn)的垂直方向劃痕，可以形成若干交叉點(diǎn)，作為固定的檢測點(diǎn)，以解決了前后觀(guān)察時(shí)位置不固定的問(wèn)題。

二、Culture Insert方法

實(shí)驗步驟：

準備材料：細胞，培養液，culture Insert，鑷子。

1、準備細胞懸液：根據細胞類(lèi)型將細胞懸液稀釋至3-7×105個(gè)/ml，濃度控制在24小時(shí)內融合成單層。 

2、在培養插件的每個(gè)孔中加入70ul細胞懸液，放入培養箱中培養。

3、細胞貼壁后，使用滅菌的鑷子移除培養插件。

4、加入無(wú)血清培養基培養。

5、每隔4-6小時(shí)拍照記錄。

6、根據收集圖片使用Wimasis分析實(shí)驗結果。

三、實(shí)驗對比

好了，以上就是中洪小編做的這些對比了！總體來(lái)說(shuō)Culture Insert實(shí)驗方法更勝一籌，在經(jīng)濟允許的情況下，選擇這種實(shí)驗方法比較好哦。若實(shí)驗經(jīng)費不足，自己手畫(huà)也是不錯的選擇。