細胞轉染途徑

化學(xué)介導——利用載體分子包被核酸使其呈現中性電荷或正電荷

DEAE

磷酸鈣法

人工脂質(zhì)體法

物理介導——在細胞膜表面產(chǎn)生一個(gè)瞬時(shí)的孔從而導入DNA

顯微注射法

電穿孔法

基因槍法

病毒介導——利用基因工程病毒轉染非病毒基因到細胞中

逆轉錄病毒

腺病毒

優(yōu)點(diǎn)

缺點(diǎn)

磷酸鈣共沉淀

1.便宜且容易獲得。

2.適用于生產(chǎn)瞬時(shí)和穩定的蛋白質(zhì)。

3.轉染效率高（不限制細胞系）。

1.需要仔細制備試劑   – CaPO4溶液對pH，溫度和緩沖鹽濃度的變化敏感。2.可重復性較差。

3.有細胞毒性，尤其對原代細胞。

4.不能采用RPMI培養基，由于其含高濃度的磷酸鹽。

5.不適用于動(dòng)物體內轉染。

病毒轉染法

1.高轉染效率（對原代細胞有80-90%）。

2.適用于較難轉染的細胞系。

3.可用于體內轉染。

4.可用于構建穩定表達或瞬時(shí)表達的細胞系。

1.被轉染的細胞系必須含有病毒受體。

2.基因插入大小受限（病毒載體~10 kb，非病毒載體~100 kb）。

3.技術(shù)難度高，且構建重組蛋白很費時(shí)。

4.存在生物安全問(wèn)題（激活潛在疾病，免疫原性反應，細胞毒性，插入突變，使細胞惡性轉化）。

人工脂質(zhì)體法

1.操作快速簡(jiǎn)單。

2.結果可重復。

3.轉染效率高。

4.可轉染DNA，RNA和蛋白質(zhì)。

5.適用于生產(chǎn)瞬時(shí)和穩定的蛋白質(zhì)。

6.可用于體內轉染。

1.需進(jìn)行條件優(yōu)化(一些細胞系對陽(yáng)離子脂質(zhì)體較敏感)。

2.有些細胞系不容易轉染。

3.血清的存在干擾復合物的形成，導致低轉染效率。

4.培養基中血清的缺失會(huì )增加細胞毒性。

電穿孔法

1.原理簡(jiǎn)單。

2.條件優(yōu)化后可產(chǎn)生重復性的結果。

3.不需要載體。

4.不限制細胞類(lèi)型和條件。

5.條件優(yōu)化后可以快速轉染大量細胞。

1.需要特殊的設備。

2.需要優(yōu)化電轉脈沖和電壓參數。

3.對細胞傷害很大。

4.細胞死亡率很高因此需要大量細胞

會(huì )不可逆轉地損壞細胞膜，溶解細胞。