CRISPR/Cas9技術(shù)自問(wèn)世以來(lái)就受到了科學(xué)家們的青睞。隨著(zhù)基因敲除技術(shù)不斷更新完善，最近誕生了一種可以快速、高效制備基因敲除小鼠的工具模型--B-Cas9敲進(jìn)小鼠。B-Cas9敲進(jìn)小鼠自身攜帶Cas9蛋白，只需注射sgRNA就可以對基因進(jìn)行編輯。那么，我們?yōu)槭裁葱枰狟-Cas9敲進(jìn)小鼠？它有哪些優(yōu)勢、應用領(lǐng)域如何呢？ B-Cas9敲進(jìn)小鼠又是如何制備的呢？

　　1）B-Cas9敲除小鼠的優(yōu)勢

　　不僅可以縮短敲除小鼠的制備周期，還可以提高敲除效率。在攜帶有Cas9蛋白的小鼠體內注射sgRNA病毒，便可即時(shí)獲得敲除小鼠；若在小鼠體內注射多個(gè)sgRNA病毒，就可以實(shí)現多基因同時(shí)敲除。

　　2）B-Cas9敲除小鼠的應用

　　不僅可以快速制備組織特異性基因敲除小鼠模型；其多基因變異更接近于腫瘤的異質(zhì)性，還可以制備多基因敲除的癌癥模型；除此之外, B-Cas9敲進(jìn)小鼠還可以結合sgRNA文庫進(jìn)行高通量篩選。

　　3）B-Cas9敲除小鼠的制備原理

　　將表達Cas9蛋白的序列插入到Rosa26位點(diǎn)當中，并在Cas9前面添加TetO元件，以達到控制Cas9表達，實(shí)現可誘導型、組織特異性表達的效果。B-Cas9敲進(jìn)小鼠只有在注射了Dox后，Dox與Teto復合體結合才能誘導Cas9蛋白的表達。

　　4） B-Cas9敲進(jìn)小鼠與國外引進(jìn)的Cas9敲進(jìn)小鼠作比較，我們不難發(fā)現，B-Cas9敲進(jìn)小鼠更加有優(yōu)勢。時(shí)間上省去了運輸和隔離的3-4個(gè)月，費用也減少一半多。從遺傳背景和技術(shù)改造來(lái)看，B-Cas9敲進(jìn)小鼠的遺傳背景是純凈的C57BL/6背景，而國外引進(jìn)的Cas9敲進(jìn)小鼠是129背景上回交的。B-Cas9敲進(jìn)小鼠最大的優(yōu)勢在于其可誘導、可逆性表達Cas9,讓實(shí)驗更加方便,易于操控。