目的: 討論bcl-2基因修飾神經(jīng)干細胞移植對脊髓損傷大鼠損傷神經(jīng)功用恢復的影響。
辦法: 體外培育大鼠神經(jīng)干細胞,經(jīng)Ad-EGFP為載體介導端B淋巴細胞瘤-2基因(bcl-2)基因轉染神經(jīng)干細胞,分為3組:對照組、陰性轉染組、bcl-2轉染組。Western-blot檢測神經(jīng)干細胞在轉染前后bcl-2蛋白的表達。成年雌性SD大鼠85只,造模勝利72只,隨機分為對照組,NSCs組,bcl-2-NSCs組,24只/組,依照改進(jìn)的Allen打擊法樹(shù)立大鼠急性脊髓損傷模型。經(jīng)過(guò)BBB評分、斜板實(shí)驗停止運動(dòng)功用評定。造模后7 d經(jīng)過(guò)RT-PCR及Western-blot檢測檢測脊髓損傷區四周HSP27、c-fos基因的表達,TUNEL法檢測細胞凋亡狀況。造模后4周取材行病理切片HE染色及熒光顯微鏡觀(guān)測EGFP標志的NSC存活及散布狀況,經(jīng)過(guò)SEP和MEP察看大鼠神經(jīng)電生理恢復狀況。
結果: bcl-2基因轉染大鼠神經(jīng)干細胞后,bcl-2轉染組與對照組、陰性轉染組相比bcl-2基因和蛋白程度均有表達(P<0.05);大鼠下肢運動(dòng)功用評價(jià)bcl-2-NSCs組優(yōu)于NSCs組,NSCs組優(yōu)于對照組。造模后72 h,bcl-2-NSCs組細胞凋亡數均明顯低于對照組和NSCs組(P<0.05)。造模后7 d,與對照組和NSCs組相比,bcl-2-NSCs組HSP27基因和蛋白的表達均較顯著(zhù)升高(P<0.05),bcl-2-NSCs組c-fos基因和蛋白的表達較顯著(zhù)降低(P<0.05)。造模后4周,HE染色對照組可見(jiàn)脊髓組織缺失及脊髓空泛構成,無(wú)神經(jīng)軸索經(jīng)過(guò)。NSCs組損傷區可見(jiàn)少量神經(jīng)軸索樣構造,脊髓空泛較小,bcl-2-NSCs組可見(jiàn)較多神經(jīng)軸索樣構造,未見(jiàn)脊髓空泛。EGFP標志的陽(yáng)性細胞數:bcl-2-NSCs組最多,NSCs組次之,對照組未見(jiàn),且各組之間差別有顯著(zhù)性(P<0.05)。造模后4周,SEP和MEP的埋伏期:bcl-2-NSCs組<NSCS組<對照組,且各組之間差別有顯著(zhù)性(P<0.05);波幅:bcl-2-nscs組>NSCs組>對照組,且各組之間差別有顯著(zhù)性意義(P<0.05)。
<NSCS組<對照組,且各組之間差別有顯著(zhù)性(結論: 經(jīng)過(guò)Ad-EGFP為載體介導端B淋巴細胞瘤-2基因(bcl-2)基因轉染使神經(jīng)干細胞可以促進(jìn)體外培育的大鼠神經(jīng)干細胞增殖。bcl-2基因修飾神經(jīng)干細胞移植可促進(jìn)脊髓損傷大鼠神經(jīng)突觸的再生,升高脊髓損傷區HSP27表達,降低脊髓損傷區bcl-2基因的表達和神經(jīng)細胞凋亡,改善大鼠的肢體運動(dòng)功用和電生理功用。