目的 樹(shù)立小鼠肝炎病毒(MHV)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測辦法,并初步應用于實(shí)驗裸腰鼠等嚙齒類(lèi)動(dòng)物的檢測。
辦法 選擇MHVE基因激進(jìn)區域設計合成特異性引物和探針,樹(shù)立熒光定量PCR辦法,并對辦法特異度、敏感度、線(xiàn)性、反復性和穩定性停止辦法學(xué)考證。同時(shí)用樹(shù)立的辦法對79只清潔級小鼠、35只SPF小鼠、63只裸鼴鼠、10只長(cháng)爪沙鼠、20只金黃倉鼠和4只黃鼠停止MHV檢測。
結果 勝利樹(shù)立了MHV實(shí)時(shí)熒光定量PCR辦法;辦法的線(xiàn)性范圍為(1×101~1×109)拷貝/μL,與仙臺(SV)病毒、呼腸孤病毒3型(Reo3)、小鼠肺炎病毒(PVM)、牛冠狀病毒(BCV)均無(wú)穿插反響,辦法的檢測敏感度為10拷貝/L。反復性和穩定性實(shí)驗顯現實(shí)驗間變異系數均小于5%。檢測結果顯現63只裸鼴鼠、35只SPF小鼠、10只長(cháng)爪沙鼠、20只金黃倉鼠和4只黃鼠均為陰性。79只清潔級小鼠MHV陽(yáng)性率為22.78%。樹(shù)立的辦法與RT-PCR比擬,可信度達97.47%。
結論 樹(shù)立的MHV 熒光定量PCR辦法特異、敏感,可以對多種嚙齒類(lèi)動(dòng)物體內攜帶的 MHV 停止檢測。