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【動(dòng)物實(shí)驗外包服務(wù)】-樹(shù)鼬連接黏附分子A的基因克隆及初步功能研究

  目的 獲取樹(shù)鼬連接黏附分子A的全長(cháng)編碼序列并進(jìn)行分子特征分析,探討JAM-A作為呼腸孤病毒受體入侵樹(shù)晌原代肺細胞的作用機制。

  方法 提取健康樹(shù)鼬組織總RNA,采用反轉錄PCR和cDNA末端快速克隆技術(shù)獲取JAM-4基因; Unipro UGENE分析編碼氨基酸,使用MEGA6.0軟件最大似然法構建系統發(fā)育樹(shù);實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測JAM-A在樹(shù)剿25個(gè)組織和血液中的表達分布情況;于樹(shù)購原代肺上皮細胞上進(jìn)行受體的特異性抗體阻斷處理,然后采用免疫熒光法觀(guān)察病毒抗原對呼腸孤病毒感染的影響。

  結果 獲取了JAM-A基因cDNA全長(cháng)序列,2962bp;系統發(fā)育樹(shù)進(jìn)化分析顯示JAM-4基因與人的親緣關(guān)系較嚙齒類(lèi)更近;JAM-A分子廣泛表達于樹(shù)剿的外周組織,而在呼吸道和消化道表達水平更高。特異性抗體作用于細胞顯著(zhù)降低病毒抗原的免疫熒光積分吸光度值(P<0.0001)。

  結論 首次克隆并分析了JAM-A的基因序列,驗證JAM-A分子是呼腸孤病毒入侵樹(shù)刪的主要受體,提示樹(shù)晌可作為一種新的呼腸孤病毒動(dòng)物模型。

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