目的：建立快速檢測實(shí)驗大鼠冠狀病毒和仙臺病毒的雙重PCR方法?

　　方法：根據大鼠冠狀病毒 N 基因?仙臺病毒 L 基因設計特異性引物;經(jīng)過(guò)雙重PCR優(yōu)化,特異性和敏感性的檢測,建立雙重PCR體系? 應用該 PCR體系檢測人工感染仙臺病毒組織DNA樣本和實(shí)驗動(dòng)物組織樣本,并與ELISA方法比對?

　　結果：雙重PCR擴 增出大鼠冠狀病毒(168bp)和仙臺病毒(262bp)目的條帶,PCR擴增產(chǎn)物測序結果利用核酸BLAST功能進(jìn)行同源 序列對比,仙臺病毒和大鼠冠狀病毒同源性分別為100%和99%? 仙臺病毒和大鼠冠狀病毒的檢測下限為1.56× 102copies/μL? 特異性檢測對小鼠肝炎病毒擴增,產(chǎn)生片段大小近似大鼠冠狀病毒產(chǎn)物? 應用建立的雙重PCR體 系檢測人工感染仙臺病毒組織DNA樣本,30份DNA標本均被檢出;檢測94份實(shí)驗動(dòng)物肺組織樣本,結果均陰性?

　　結論：建立的雙重PCR方法操作簡(jiǎn)單?快速?特異性強?靈敏度高,能夠實(shí)現對實(shí)驗動(dòng)物仙臺病毒和大鼠冠狀病毒 病原體的快速檢測?