目的: 利用CRISPR/Cas9系統,敲除小鼠黑色素瘤細胞系的MATP基因,為MATP基因的功能研究奠定基礎。
方法: 利用http://crispr.mit.edu/網(wǎng)站,設計針對MATP的特異性引物,并將引物鏈接到pCAS9/gRNA1載體。將陽(yáng)性載體轉染小鼠黑色素瘤細胞系B16F10,利用無(wú)限稀釋的方法獲得轉染后的單克隆細胞株。提取不同細胞株的基因組,通過(guò)測序的方法進(jìn)一步篩選出發(fā)生MATP基因切割的細胞株,并利用Western-blot的方法驗證MATP的表達情況。
結果: 成功獲得了3株MATP基因敲除的細胞株,Western-blot結果表明,該細胞株不表達MATP蛋白。
結論: 利用pCAS9/gRNA1載體,可以實(shí)現B16F10細胞系MATP基因的敲除。