目的:探討核轉錄因子TRB?RXR和激動(dòng)劑T4對長(cháng)爪沙鼠Cip4基因表達的調控作用?

　　方法:合成長(cháng)爪沙鼠Cip4基因啟動(dòng)子區序列,構建報告載體pGL3-Cip4;將轉錄因子TRB?RXR克隆到pcDNA3.1表達載體上?將pGL3-Cip4,pcDNA3.1-TRB,pcDNA3.1-RXR和pRL-TK(參照質(zhì)粒)載體共轉染到HEK-293細胞,構建Cip4基因的熒光素酶雙報告系統?觀(guān)察質(zhì)粒用量?TRB的激動(dòng)劑甲狀腺素T4等處理對轉錄活性的影響?

　　結果:以長(cháng)爪沙鼠Cip4啟動(dòng)子區為啟動(dòng)序列的雙熒光素酶報告基因系統在(啟動(dòng)子+轉錄因子):pRL-TK=20∶1?總質(zhì)粒量為2μg時(shí)轉染效率最高,并具有最高的熒光素酶活性?檢測結果顯示,僅加入TRB不改變Cip4的轉錄水平(P>0.05),僅加入RXR可以增加Cip4的轉錄水平(P<0.05),RXR與T4共同作用可上調Cip4的轉錄水平(P<0.001)?TRB與T4共同作用可下調Cip4活性(P<0.05)?RXR?TRB?T4共存時(shí),Cip4的轉錄水平顯著(zhù)下調(P<0.01)?

　　結論:本研究證實(shí)了T4?TRB及RXR共調控長(cháng)爪沙鼠Cip4基因的轉錄,模擬了配體激活型轉錄因子TRB/RXR活化目的基因Cip4的轉錄,同時(shí)證實(shí)了Cip4的轉錄活化與RXR信號通路密切相關(guān),為揭示甲狀腺素在人類(lèi)NAFLD中的作用機制奠定了基礎?本報告基因系統可用于配體激活型轉錄因子調控Cip4基因表達的機理分析及相關(guān)藥物的篩選?