目的:探索一種簡(jiǎn)單?易行的體外快速?分離培養樹(shù)鼩角膜基質(zhì)細胞的方法?

　　方法:實(shí)驗分為實(shí)驗組A和實(shí)驗組B,取樹(shù)鼩角膜基質(zhì)層,實(shí)驗組A剪碎,用1% 的Ⅱ型膠原酶消化60min, 離心后重懸接種;實(shí)驗組B用Ⅱ型膠原酶聯(lián)合中性蛋白酶消化? 比較記錄原代及傳代細胞生長(cháng)情況?傳代時(shí)間,細 胞行波形蛋白免疫組化及免疫熒光鑒定?

　　結果:膠原酶消化法可成功的獲取原代細胞,9d后即可進(jìn)行傳代,細 胞形態(tài)好;傳代細胞生長(cháng)較快,2~3d即可傳一代;雙酶消化法獲得的CSCs較少,10d才可見(jiàn)少量散落細胞,15~ 20d可傳代;波形蛋白免疫組化及免疫熒光表達陽(yáng)性?

　　結論:兩種方法均可成功培養出CSCs,但膠原酶消化法能 更容易高效分離培養出大量樹(shù)鼩CSCs?