目的:建立小鼠諾如病毒實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法,為建立MNV規范化檢測方法提供依據。
方法:根據NCBI公布的60個(gè)MNV病毒株核酸序列設計特異性引物,構建標準陽(yáng)性質(zhì)控品,建立MNV實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法,并進(jìn)行特異性、靈敏度、重復性及穩定性評價(jià)。用該方法對766只送檢小鼠的盲腸內容物樣品進(jìn)行檢測,初步了解北京地區實(shí)驗小鼠MNV感染狀況。
結果:成功建立MNV實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法,該方法特異性好,與同種屬人類(lèi)諾如病毒(HuNoVs)、貓杯狀病毒(FCV)均無(wú)交叉反應,檢測靈敏度可達101 copies/μL。批內及批間CT值變異系數均小于2%。應用該方法在766份小鼠盲腸內容物樣品中檢出301份MNV核酸陽(yáng)性樣品,陽(yáng)性率39.3%。
結論:建立的MNV實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法特異性好,靈敏度高,重復性好,可以用于MNV的快速定量檢測。