目的：應用CRISPR/Cas9技術(shù)構建miRNA-29b1基因敲除小鼠。

　　方法：針對miRNA-29b1基因設計一段sgRNA，sgRNA和Cas9體外轉錄后顯微注射至C57BL/6小鼠受精卵細胞。小鼠出生后取其基因組DNA進(jìn)行測序以鑒定基因型，同時(shí)取小鼠心、肝、脾、肺、腎等臟器研磨后提取總RNA，通過(guò)real-time PCR分析miRNA-29b1在這些臟器中的表達。

　　結果：設計了20 bp的miRNA-29b1sgRNA并與Cas9一起進(jìn)行了體外轉錄，顯微注射小鼠受精卵細胞后獲得miRNA-29b1基因突變小鼠。測序結果表明突變小鼠有兩種基因型，一種為10 bp的缺失突變；另一種為22 bp的缺失突變，同時(shí)伴有3 bp的插入突變。與野生型小鼠相比，基因突變小鼠心、肝、脾、肺、腎等組織中miRNA-29b1表達量下降明顯。

　　結論：應用CRISPR/Cas9技術(shù)成功構建miRNA-29b1基因敲除小鼠。