目的:探討小鼠DNAJB13與HK1是否具有相互作用。
方法:應用雙酶切連接方法構建pGEX-4T-1/Dnajb13原核表達載體,測序驗證;重組質(zhì)粒轉化感受態(tài)細胞DH5α,用IPTG誘導融合蛋白GST-DNAJB13表達,采用SDS-PAGE考馬斯亮藍染色和 Western blotting分析蛋白和鑒定;提取小鼠睪丸蛋白,采用GST pull down檢測DNAJB13與HK1是否具有相互作用。
結果:成功構建pGEX-4T-1-Dnajb13重組質(zhì)粒,測序結果與標準序列一致;轉化重組質(zhì)粒的大腸桿菌在37 ℃,IPTG濃度1 mmol/L誘導下高效表達融合蛋白;GST pull down檢測結果陽(yáng)性,顯示DNAJB13與HK1存在相互作用。
結論:在小鼠睪丸中,DNAJB13與 HK1存在相互作用,可能參與精子形成和精子運動(dòng)。