1.  MSP原理：MSP是一種簡(jiǎn)便、特異的、敏感的檢測單基因甲基化的方式。其基本原理是用亞硫酸氫鈉處理基因組DNA，未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變，然后用3對特異性的引物對所測基因的同一核苷酸序列進(jìn)行擴增。擴增產(chǎn)物用DNA瓊脂糖凝膠電泳，凝膠掃描觀(guān)察分析結果。

      （1）在50ul體系中，DNA（2~5 μg）經(jīng)NaOH（終濃度值0.2 mol/L）在37℃變性10 Min。對于ng級別的人基因組DNA，在進(jìn)行修飾前加入2μg蛙魚(yú)精DNA為載體。

      （2）加入30 μl剛配制好的10 mmo/L 氫醌與520/1的40.5%亞硫酸氫鈉混勻，之后石蠟油隔絕空氣的條件下，避光在50%溫育16 h。

      （3）修飾后的DNA過(guò)WizerdDNA純化柱，用50/1 L 水洗脫。室溫下用NaOH（終濃度為0.3 mol/L）修飾5 min，之后用乙醇沉淀。

      （4）DNA溶于20 μl 水中，立即使用或在-20℃保存。