RT-pcr實(shí)驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。 

要求： 

1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。 

2. RT按要求做，一般不會(huì )出太大問(wèn)題。 

3. PCR，按常規。但如需擴長(cháng)片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單改變Mg2 濃度、退火溫度能解決的。 

1）RT和PCR時(shí)的引物設計是不是一定要先知道目的基因的序列？必須在RT時(shí)，引物設計有3種方法即a：Random 9mers；b：Oligo dT-Adaptor Primer；和c：特異的下游引物。

    如果用a和b方法，是擴增的所有的cDNA（理論上），還要用此產(chǎn)物做PCR 的模板繼續擴增。 

    如果用c方法，那么要去那里查它的序列呢？