石蠟切片不僅用于觀(guān)察正常細胞組織的形態(tài)結構，也是病理學(xué)和法醫學(xué)等學(xué)科用以研究、觀(guān)察及判斷細胞組織的形態(tài)變化的主要方法，而且也已相當廣泛地用于其他許多學(xué)科領(lǐng)域的研究中。

石蠟切片免疫組化優(yōu)缺點(diǎn)：

石蠟切片免疫組化：

1. 烤片:組織切片入放入75℃烤箱中烤1.5h；

2. 脫蠟:切片在二甲苯放置10min更換二甲苯在放置10min；

3. 水化:將切片依次放入100%乙醇、100%乙醇、95%乙醇和80%乙醇中、純化水各5min；

4. 抗原修復:將切片放入修復盒中加入抗原修復液(檸檬酸緩沖液)，高壓鍋加熱到自動(dòng)放氣，兩分鐘后離開(kāi)熱源自然冷卻。棄去抗原修復液,將切片用PBS淋洗；

5. 將切片移入濕盒中加入新鮮配制的3%雙氧水,以去除內源性過(guò)氧化物酶封閉液，室溫孵育10分鐘，PBS充分淋洗；

6. 滴加正常山羊血清封閉液，室溫30分鐘，甩去多余液體；

7. 滴加一抗工作液，37℃孵育2h（或4℃過(guò)夜），然后PBS充分淋洗；

8 滴加兔/鼠二抗工作液，室溫孵育1h，PBS充分淋洗；

9. DAB顯色5-10分鐘，在顯微鏡下掌握染色程度 ；

10. PBS或自來(lái)水沖洗1分鐘 ；

11. 蘇木精復染3分鐘，鹽酸酒精分化,反藍；

12. 自來(lái)水沖洗1分鐘 脫水、透明、封片、鏡檢。

實(shí)驗問(wèn)答

問(wèn)：我的標本是大鼠的脊髓損傷模型的損傷部位，4%多聚甲醛經(jīng)心灌注固定，后固定4 h，常規脫水、透明、浸蠟、包埋，切片厚度5 μm。但是結果很糟糕，切片上有嚴重的碎裂。
一張HE染色的切片。這是為什么呢？ 

答：石蠟過(guò)脆、刀口過(guò)鈍、切片太薄、角度不平、還有些組織本身易碎，這些都是可能的原因，需要結合具體情況來(lái)測試，可試試加點(diǎn)蜂蠟，軟化蠟塊。