實(shí)驗方法原理、
本實(shí)驗用1μg/ml
三尖杉酯堿HT在體外誘導培養的HL-60細胞發(fā)生凋亡，同時(shí)也有少數細胞發(fā)生壞死。用Hoechst33342和碘化丙啶（propidium
iodide，PI）對細胞進(jìn)行雙重染色，可以區別凋亡、壞死及正常細胞。
三尖杉酯堿（HT）是我國自行研制的一種對急性粒細胞白血病，急性單核白血病等有良好療效的抗腫瘤藥物。研究表明HT在0.02~5μg/ml范圍內作用2小時(shí)，即可誘導HL-60細胞凋亡，并表現出典型的凋亡特征。
細胞膜是一選擇性的生物膜，一般的生物染料如PI等不能穿過(guò)質(zhì)膜。當細胞壞死時(shí)，質(zhì)膜不完整，PI就進(jìn)入細胞內部，它可嵌入到DNA或RNA中，使壞死細胞著(zhù)色，凋亡細胞和活細胞不著(zhù)色。而一些活細胞染料由于為親脂性物質(zhì)，可跨膜進(jìn)入活細胞，因而可進(jìn)行活細胞染色。Hoechst33342是一種活性熒光染料且毒性較弱，它是雙苯并咪唑的一種衍生物。與DNA特異結合（主要結合于A(yíng)-T）堿基區），顯示凋亡細胞和活細胞。凡是看到有凋亡小體的細胞都是凋亡細胞。
一、試劑準備
1.
三尖杉酯堿（HT）：300μg/ml；
2. Tris-HCl（pH7.5）：100mmol/L；
3.
EDTA緩沖液：5mol/L；
4.
堿性裂解液：0.2mol/L NaOH；
5. 醋酸鈉：3mol/L KAc（pH4.8）；
注意事項：
2.
熒光顯微鏡下觀(guān)察細胞時(shí)，由于熒光易碎滅，觀(guān)察時(shí)要盡量快。
其他：
細胞死亡根據其性質(zhì)、起源及生物學(xué)意義區分為凋亡和壞死兩種不同類(lèi)型。凋亡普遍存在于生命界，在生物個(gè)體和生存中起著(zhù)非常重要的作用。它是細胞在一定生理條件下一系列順序發(fā)生事件的組合，是細胞遵循一定規律自己結束生命的自主控制過(guò)程。細胞凋亡具有可鑒別的形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)特征。
在形態(tài)上可見(jiàn)凋亡細胞與周?chē)毎撾x接觸，細胞變園，細胞膜向內皺縮、胞漿濃縮、內質(zhì)網(wǎng)擴張、細胞核固縮破裂呈團塊狀或新月?tīng)罘植?、內質(zhì)網(wǎng)和細胞膜進(jìn)一步融合將細胞分成多個(gè)完整包裹的凋亡小體，凋亡小體最后被吞噬細胞吞噬消化。在凋亡過(guò)程中細胞內容物并不釋放到細胞外，不會(huì )影響其它細胞，因而不引起炎癥反應。
