1 劃痕

       腫瘤細胞在體外仍具有遷移的能力，本實(shí)驗借鑒體外細胞致傷愈合實(shí)驗模型，利用細胞劃痕法測定了腫瘤細胞的運動(dòng)特性。

實(shí)驗方法：

       將細胞密度為5~10×10⁵個(gè)/mL的XXX細胞鋪于24孔板（每孔500 μL）上，加入含10%胎牛血清的RMPI.1640培養液，培養16~24h，使形成單層細胞。用10μL移液槍槍頭（或者無(wú)菌牙簽）在單層細胞上呈“一”字劃痕，用PBS清洗3次，孵育24h后換成含10%胎牛血清的RMPI.1640培養液，孵育24h。觀(guān)察并拍照：吸去培養液，用PBS清洗3次后，在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察并拍照。

2 細胞粘附

       細胞粘附實(shí)驗通常分為兩類(lèi)，即細胞與細胞粘附和細胞與基質(zhì)粘附。機體內許多細胞，如上皮細胞固定在某處發(fā)揮功能；另一些細胞，如白細胞，活躍運動(dòng)，就需要不斷調節細胞粘附。細胞粘附性的改變在腫瘤轉移過(guò)程中也發(fā)揮著(zhù)重要作用。惡性腫瘤具有從原發(fā)瘤分離及在體內擴散的能力，提示這些細胞相互識別及粘附機制發(fā)生了改變。

實(shí)驗方法：

       用10 μg/mL的纖連蛋白(fibronectin,FN)預鋪96孔板，70 μL/孔，4℃過(guò)夜后，PBS洗3遍，再用1% BSA于37℃封閉1h，PBS洗3遍。將待測XXX細胞培養至對數生長(cháng)期，消化細胞，用無(wú)血清培養基懸浮細胞，調整濃度為5×10⁵/mL分別接種于預鋪FN的96孔板中，每孔5000個(gè)細胞，每組設3個(gè)復孔。37℃孵育1h后，PBS洗去未黏附的細胞。

檢測方法1：

       3.5%戊二醛于4℃固定0.5h，PBS洗3遍；0.1%的結晶紫染色，室溫靜止0.5h，PBS洗3遍，每孔加入100 μL 10%的乙酸，5~10min后用酶標儀檢測595nm的吸光度值，用以表示黏附細胞的多少。

檢測方法2：按照每孔加入100μL甲醇，固定15 min每孔加入100 μL吉姆薩染液，染色15min，PBS洗去染液倒置顯微鏡下隨機取5個(gè)隨機視野計數粘附細胞數量病拍照，統計結果。

檢測方法3：MTT法或CCK-8檢測細胞量。

3 Transwell遷移

       細胞遷移實(shí)驗將Transwell小室放入培養板中，小室內稱(chēng)上室，培養板內稱(chēng)下室，上下層培養液以聚碳酸酯膜相隔，將研究的XXX細胞種在上室內，由于聚碳酸酯膜有通透性，下層培養液中的成分可以影響到上室內的細胞，應用不同孔徑和經(jīng)過(guò)不同處理的聚碳酸酯膜，就可以進(jìn)行共培養、細胞趨化、細胞遷移、細胞侵襲等多種方面的研究。

實(shí)驗方法：

       所有細胞培養試劑和Transwellchamber放在37℃溫育。待測XXX細胞培養至對數生長(cháng)期，消化細胞，用PBS和無(wú)血清培養基先后洗滌一次，用無(wú)血清培養基懸浮細胞，計數，調整濃度為2×10⁵/mL。在下室（即24孔板底部）加入600－800μL含10%血清的培養基，上室加入100－150μL細胞懸液，繼續在孵箱培養24小時(shí)。用鑷子小心取出chamber，吸干上室液體，移到預先加入約800μL甲醇的孔中，室溫固定30 min。取出chamber，吸干上室固定液，移到預先加入約800μL Giemsa染液的孔中，室溫染色15－30 min。輕輕用清水沖洗浸泡數次，取出chamber，吸去上室液體，用濕棉棒小心擦去上室底部膜表面上的細胞。用小鑷子小心揭下膜，底面朝上晾干，移至載玻片上用中性樹(shù)膠封片。顯微鏡下取9個(gè)隨機視野計數，統計結果。

4 Transwell侵襲

       所謂Transwell侵襲實(shí)驗，其實(shí)是指將Transwell這一技術(shù)應用于腫瘤細胞侵襲研究的一種實(shí)驗。

實(shí)驗方法：

       基質(zhì)膠準備：將凍存于－80℃冰箱的BD matrigel 4℃過(guò)夜（24h），變成液態(tài)。取300μL無(wú)血清培養基，加入60μL（或50μg/每室）Matrigel，4℃混勻，加入上室各100μL（3個(gè)室），放入37℃培養箱中，孵育4-5h。當出現“白色層”時(shí)，說(shuō)明已經(jīng)變?yōu)楣虘B(tài)。消化XXX細胞，無(wú)血清培養基洗3次，計數，配成細胞懸液。用無(wú)血清培養基洗Matrigel洗1次，每孔加入100μL細胞懸液。下腔室中加入500μL含有20%FBS條件培養基。37℃培養箱中，孵育20-24h。取出transwell用PBS洗2次，5%戊二醛4℃固定。加入0.1%結晶紫染色或Giemsa染色，室溫染色5－10min，0.5h，PBS洗2次，用棉球擦去上表面細胞，顯微鏡下取9個(gè)隨機視野計數，統計結果。