慢病毒源于反轉錄病毒,但又有所不同。在感染能力方面比反轉錄病毒還強,可有效感染神經(jīng)元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、干細胞等多中類(lèi)型的細胞,又很少引發(fā)基因的免疫反應。
實(shí)驗方法:
在大規模的感染之前,優(yōu)化以下參數:細胞種植密度,慢病毒的數量,嘌呤霉素的濃度,感染時(shí)間,以確定一個(gè)實(shí)驗的最適條件。在6cm培養皿中種植適當密度的XXX細胞,每孔體積6mL。貼壁細胞:轉染前1天種植XXX細胞。懸浮細胞:轉染當天種植XXX細胞,培養基中需要含有凝聚胺。XXX細胞中加入病毒:貼壁細胞,棄掉培養基,加入新鮮的含有凝聚胺的培養基?;蛘?,棄掉部分培養基并且補充含有凝聚胺的培養基。調整體積和凝聚胺的濃度,使得凝聚胺的終濃度為8μg/mL。病毒感染:孵育細胞過(guò)夜。感染后24h更換培養基。棄掉培養基,換入6mL新鮮的培養基。如果需要抗生素選擇,則使用含有抗生素的新鮮培養基。注意:嘌呤霉素的濃度根據每種細胞系來(lái)進(jìn)行優(yōu)化;常用的濃度范圍為2-5μg/mL。孵育細胞,根據需要每隔幾天更換培養基(如果需要,則要含有抗生素)。孵育時(shí)間的長(cháng)短主要依賴(lài)于感染后的試驗。