細胞粘附分子(cell adhesion molecules，CAMs) 是一類(lèi)膜表面糖蛋白，它們以配體－受體特異性結合的方式介導細胞與細胞間、細胞與細胞外基質(zhì)間的相互接觸和結合并調節細胞功能，在胚胎發(fā)育和分化、正常組織結構的維持、炎癥反應、免疫應答、凝血和血栓形成、創(chuàng )傷修復、腫瘤浸潤與轉移等許多生理和病理過(guò)程中發(fā)揮重要的生物學(xué)作用。層粘連蛋白LN和層粘連蛋白FN是常用的用于細胞粘附能力檢測兩種蛋白，多數腫瘤細胞對于上述蛋白具有較強的粘附能力，以L(fǎng)N或FN蛋白預先包被96孔板，按照實(shí)驗設計將一定量的細胞鋪至孔底部，繼續培養細胞至實(shí)驗設定時(shí)間，取出培養板，洗去未粘附至孔底的細胞，剩余細胞行進(jìn)行蘇木素或結晶紫染色，以酶標儀測定各孔讀數，讀數高低與細胞粘附能力成正比。本實(shí)驗主要用于判定細胞在經(jīng)過(guò)各種藥物處理、基因轉染、敲除或培養條件改變后，細胞的粘附能力改變情況。

（一）實(shí)驗材料及試劑

96孔培養板、倒置顯微鏡、酒精燈、移液槍、CO₂培養箱、酶聯(lián)儀等；As₂O₃、FN、MTT等。

（二）實(shí)驗內容

取70μg/ml的FN包裝96孔板，每孔30μl，在超凈臺風(fēng)干后放入4℃冰箱中備用。實(shí)驗時(shí)取1× 10⁶/ml的細胞接種于已包被FN的96孔培養板中，每孔100μl，設4復孔，待細胞貼壁后(4～5h)，加入濃度分別為2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml的As₂O₃注射液100μl，對照加入100μl培養液，置于37℃、5%CO₂的培養箱內分別孵育20、40、60、120min，吸出培養液，每孔加入5mg/ml的MTT20μl，繼續培養4h，棄去全部上清，每孔加入100μl 0.04mol/L鹽酸異丙醇，微型振蕩器振蕩5～10min，使結晶完全溶解，在酶聯(lián)儀波長(cháng)570nm處測出各孔吸光度值(OD)，以OD值代表黏附細胞數，按下列公式計算細胞黏附抑制率:抑制率(%)=〔1-(加藥孔平均OD值-空白孔平均OD值)/對照孔平均OD值-空白孔平均OD值)〕× 100%。

（三）注意事項

       1、細胞濃度或細胞數。

       2、粘附時(shí)間多長(cháng)時(shí)間。

       3、粘附后方法的選擇：即選用什么方法來(lái)確定細胞粘附效果，有染色，顯微鏡計數，熒光分析等。