1 預先培養材料細胞,并處理準備實(shí)驗用在載玻片,蓋玻片。
2 是眼前配置0.2%的常熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠,將溶液放入60攝氏度水浴中,每個(gè)載玻片放入溶液中3S,然后取出。將此載玻片水平放進(jìn)37攝氏度溫箱中,大于4h,即可使用。
3 取處于對數期,生長(cháng)良好的MCF-7細胞,至于不同劑量的UV下照射一段時(shí)間,若想觀(guān)察細胞的DNA損傷修復情況,還可將部分細胞在培養箱中培養一段時(shí)間??稍O置不同時(shí)間梯度來(lái)做對照實(shí)驗。
4 細胞消化后,離心富集,并用PBS液洗滌2-3次,清洗過(guò)程中要注意細胞要置于冰盒中,以抑制DNA損傷修復系統的持續作用,吹打細胞懸液不要過(guò)于激烈,以免細胞進(jìn)一步受到機械損傷。最后用PBS液將其密度調整為1*106-2*106個(gè)細胞/m.l