想要驗證細胞裂解是否成功？

進(jìn)行總蛋白定量吧！

想將多個(gè)樣品進(jìn)行平行實(shí)驗比較/標準化保存？

還是進(jìn)行總蛋白定量吧！

對于每種分析方法的兼容性，研究人員有必要評估檢測樣品的類(lèi)型，檢測范圍和樣本量，是否有合適的分光光度計，以及每個(gè)檢測所需的時(shí)間和成本。

中洪實(shí)拍圖

下表總結了常用的總蛋白定量分析方法：

它們總蛋白定量分析的詳細步驟，中洪君就不一一說(shuō)明了。今天，我們詳說(shuō)常用的Bradford和BCA法的區別和各自的優(yōu)缺點(diǎn)。

BCA法

該方法可以兼容樣品中高達5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20、60、80。但該方法受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保EDTA低于10mM，無(wú)EGTA，二硫蘇糖醇(DTT)低于1mM，β-巰基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于0.01%。

優(yōu)點(diǎn)：

測定快速簡(jiǎn)便，45分鐘內完成

準確靈敏,檢測濃度為5-200 mg/ml

干擾物質(zhì)少，BCA法不受大部分樣品中的去垢劑等化學(xué)物質(zhì)影響，可兼容樣品中高達5%的SDS，5%Triton X-100,5%的Tween 20

在一定濃度范圍內，有良好的線(xiàn)性關(guān)系

檢測不同蛋白質(zhì)分子的變異系數小于考馬斯亮藍法蛋白定量

缺點(diǎn)：

與熒光蛋白質(zhì)定量等方法相比，屬于化學(xué)呈色法的BCA法檢測靈敏度尚不夠

蔗糖、尿素、NH4+和EDTA影響測定結果

Bradford法：

該方法樣品中β-巰基乙醇(β-Mercaptoethanol)的濃度可高達1M，二硫蘇糖醇(DTT)的濃度可高達5mM。但該方法受略高濃度的去垢劑影響，需確保SDS低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20、60、80低于0.015%。

優(yōu)點(diǎn)：

靈敏度高，檢測簡(jiǎn)便，實(shí)際簡(jiǎn)單，干擾物至少。

缺點(diǎn)：

1、由于各種蛋白質(zhì)中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此考馬斯亮藍染色法用于不同蛋白質(zhì)測定時(shí)有較大的偏差，在制作標準曲線(xiàn)時(shí)通常選用 g-球蛋白為標準蛋白質(zhì)，以減少這方面的偏差；

2、仍有一些物質(zhì)干擾此法的測定，主要的干擾物質(zhì)有：去污劑、 Triton X-100、十二烷基硫酸鈉 (SDS) 等。