Northern blot
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發(fā)布時(shí)間：2017-10-12
關(guān)鍵是提RNA的步驟，一定要防止降解，且上樣量也要足夠大，做的時(shí)候最好是將樣品研磨充分后將TRIZAL放入研缽中，待溶解后，在放入離心管中。
提取風(fēng)干后用去離子甲酰胺溶解，其溶解度很大，一般每微升可以溶解1微克，且還可以防止RNA降解，效果很好呀！
(1) 凝膠的制備。
如準備100ml凝膠需要加入：瓊脂糖1g；10×MOPS緩沖液10ml；經(jīng)DEPC處理的水73 ml；加熱溶化凝膠，混勻，涼至50℃時(shí)加入17ml 37%的甲醛，混勻，倒膠制板，甲醛有毒且易揮發(fā)，制備變性膠應在通風(fēng)櫥內操作，電泳時(shí)應蓋嚴電泳槽；
(2) RNA樣品的準備：總RNA通常需要50μg，溶于上樣緩沖液中，在沸水浴中加熱樣品2min，冰上冷卻樣品；
(3) 凝膠電泳：以1×MOPS緩沖液作為電泳緩沖液，5～7.5V/cm跑膠2～3h，或者等到溴酚藍遷移到膠的3/4處時(shí)停止電泳；
(4) 凝膠的處理：在DEPC水中浸泡膠15min，重復3次，緩沖液要足夠使膠在容器內漂??；
(5) 轉膜、探針標記、雜交和檢測均同Southern雜交部分。
（本文轉載丁香通）
