質(zhì)粒和載體傻傻分不清楚

質(zhì)粒(Plasmid)是附加到細胞中的非細胞的染色體或核區DNA原有的能夠自主復制的較小的DNA分子(即細胞附殖粒、又胞附殖粒)。大部分的質(zhì)粒雖然都是環(huán)狀構型。

載體即要把一個(gè)有用的基因（目的基因——研究或應用基因）通過(guò)基因工程手段送到生物細胞（受體細胞），需要運載工具（交通工具）攜帶外源基因進(jìn)入受體細胞，這種運載工具就叫做載體（vector）。細菌或病毒質(zhì)粒是重組DNA技術(shù)中常用的載體。

簡(jiǎn)而言之，質(zhì)?？梢哉f(shuō)是一個(gè)統稱(chēng)，載體是質(zhì)粒改造過(guò)用來(lái)運載的工具

選用質(zhì)粒做載體的要求

以最常用的為例

（1）選分子量小的質(zhì)粒，即小載體（1－1.5kb）→不易損壞，在細菌里面拷貝數也多（也有大載體）；

（2）一般使用松弛型質(zhì)粒在細菌里擴增不受約束，一般 10 個(gè)以上的拷貝，而嚴謹型質(zhì)粒<10 個(gè)。

（3）必需具備一個(gè)以上的酶切位點(diǎn)，有選擇的余地；

（4）必需有易檢測的標記，多是抗生素的抗性基因，不特指多位 Ampr。

無(wú)論選用哪種載體，首先都要獲得載體分子，然后采用適當的限制酶將載體 DNA 進(jìn)行切割，獲得分子，以便于與目的基因片段進(jìn)行連接。

如何一眼看穿質(zhì)粒圖譜

①  復制起始位點(diǎn)Ori，了解質(zhì)粒的類(lèi)型（原核/真核/穿梭質(zhì)粒），Ori的箭頭指復制方向，其他元件標注的箭頭多指轉錄方向（正向）。

②  再看篩選標記，如抗性，決定使用什么篩選標記：

Ampr：水解β-內酰胺環(huán)，解除氨芐的毒性。

tetr ：可以阻止四環(huán)素進(jìn)入細胞。

camr：生成氯霉素羥乙?；苌?，使之失去毒性。

neor（kanr）：氨基糖苷磷酸轉移酶，使G418（卡那霉素衍生物）失活。

hygr：使潮霉素β失活。

③  看多克隆位點(diǎn)（MCS）：它具有多個(gè)限制內切酶的單一切點(diǎn)（質(zhì)粒上只能有該內切酶的唯一酶切序列，不然就一刀好幾段了），便于咱們要研究的基因的插入。如果在這些位點(diǎn)外有外源基因的插入，會(huì )導致某種標志基因的失活，而便于篩選，最常見(jiàn)的是β-半乳糖苷酶的藍白斑篩選系統。

④再看外源DNA插入片段大?。?/span>質(zhì)粒一般只能容納小于10Kb的外源DNA片段。一般來(lái)說(shuō)，外源DNA片段越長(cháng)，越難插入，越不穩定，轉化效率越低。

⑤ 是否含有表達系統元件，即啟動(dòng)子（promoter）－核糖體結合位點(diǎn)（RBS）－轉錄終止信號（AATAAA同時(shí)是poly A）。這是用來(lái)區別克隆載體與表達載體?？寺≥d體中加入一些與表達調控有關(guān)的元件即成為表達載體。選用那種載體，還是要以實(shí)驗目的為準繩。

⑥看報告基因：主要是為了能迅速檢查功能基因是否表達的陽(yáng)性判斷，表達成功的蛋白在小鼠體內分布位置。

⑦看質(zhì)粒圖譜上的箭頭：它代表DNA兩條鏈（正義鏈和反義鏈），即質(zhì)粒是環(huán)狀雙鏈DNA，它的啟動(dòng)子等在其中一條鏈上，而它的抗性基因在另一條鏈上。目的基因片段進(jìn)行連接。